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CpG-ODN是含有未甲基化的胞嘧啶(Cytosine,C)鸟嘌呤(Guanine,G)二核苷酸的寡聚脱氧核糖核苷酸(Oligodeoxynucleotide,ODN),可以对免疫系统产生强烈的刺激活性,激活B淋巴细胞增殖并分泌抗体,激活单核细胞分泌细胞因子,引发Thl(T hel per l-type,Thl)特征的体液和细胞免疫反应。Em(Emulsigen,苦杏仁酶)与抗原联合免疫,在一定程度上可以使抗原储存于抗原识别位点,并且让抗原缓慢释放,有效的延长了抗原对于免疫系统的刺激作用。相关体内试验研究表明,CpG-ODN与Em联合使用,诱导机体产生更强和更加均衡的Thl/Th2(T helper2-type,Th2)型免疫反应,也可以刺激初生仔猪产生更强更持久的细胞免疫反应。
本文以初生仔猪为研究对象,在前期的试验结果基础之上,选用免疫效果最佳剂量的CpG-ODN和10%、20%或30%浓度的Em联合使用,以肌肉注射、滴鼻和口服三种不同免疫途径免疫仔猪,通过分析免疫前后不同时间相关的免疫分子及免疫细胞,确定CpG-ODN与Em联合免疫初生仔猪的最佳途径和Em的最佳剂量,明确CpG-ODN与Em联合免疫在诱导仔猪先天性免疫应答能力中的作用。
本文通过酶联免疫吸附试验、淋巴细胞增值转化能力试验、细胞因子测定、实时荧光定量PCR、流式细胞术等技术,对CpG-ODN与Em联合免疫可能影响的多种免疫细胞和分子进行了研究,包括B细胞的抗体分泌能力、淋巴细胞的刺激指数、系统和当地Th1和Th2(T hel per 2-type,Th2)型细胞因子表达量、趋化因子及主要组织相容性复合体II(Major histocompatibility complexⅡ,MHC-Ⅱ)表达量、白细胞分化抗原(Cluster of differentiation.CD)的含量。发现Em可以辅助CpG-ODN更加显著地提高初生仔猪血清中的总抗体含量,刺激外周血淋巴细胞增殖,上调Thl型细胞因子的表达水平,下调Th2型细胞因子的表达水平,并使Th2型免疫应答向Thl型转变;同时,Em还可以辅助CpG-ODN更加显著地提高细胞因子的表达量,提高MHC-II的抗原递呈能力,减缓CD4+/CD8+比值的下降。本试验研究发现,CpG-ODN与20%Em联合使用能最有效地发挥CpG-ODN对初生仔猪的免疫作用,系统免疫中的最佳途径是肌肉注射,当地免疫中的最佳途径是滴鼻免疫,口服途径在系统免疫和当地免疫中效果均不佳。
试验结果说明,CpG-ODN与Em联合使用,Em可以有效地增强CpG-ODN对初生仔猪免疫系统的刺激作用,能更加有效地提高机体的体液免疫和细胞免疫的应答能力,提高系统、当地的免疫应答和先天性免疫应答能力,对维持初生仔猪机体健康,起到非常重要的作用。目前,CpG-ODN的免疫刺激活性研究主要集中在小鼠和人上,对其他动物包括畜禽类的研究相对较少。因此,本文的研究结果将为CpG-ODN和Em联合免疫在畜禽疫病防治中的应用奠定基础。