【摘 要】
：
非洲猪瘟（African swine fever,ASF）是一种由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）引起的猪高致死性传染病。ASFV编码蛋白p30、p54和p72等常被作为血清学诊断靶点,用于评价ASF不同阶段或发病程度的抗体水平变化。ASFV编码蛋白具有复杂性,为ASF感染血清学诊断的新方法研制带来了挑战,也带来了机会。ASF血清学诊断靶点相关深入研究有
论文部分内容阅读
非洲猪瘟（African swine fever,ASF）是一种由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）引起的猪高致死性传染病。ASFV编码蛋白p30、p54和p72等常被作为血清学诊断靶点,用于评价ASF不同阶段或发病程度的抗体水平变化。ASFV编码蛋白具有复杂性,为ASF感染血清学诊断的新方法研制带来了挑战,也带来了机会。ASF血清学诊断靶点相关深入研究有助于其感染检测、致病机理和机体免疫系统反应等探究。本研究首先收集或预测了ASFV中国流行株p30、p72、CD2V、MGF360-505R蛋白B细胞表位,设计了抗原重组串联表位蛋白,随后选取MGF360-505R-CD2v表位蛋白进行间接ELISA Ig G抗体检测方法建立的研究。具体研究结果如下:1.ASFV中国流行株血清学诊断候选靶点（p30、p72、CD2V和MGF360-505R）的抗原表位（区域）分析与串联表位蛋白设计。经生物信息学分析发现,ASFV中国流行株的p30、p72和CD2V蛋白序列保守性较高,仅ASFV p30除在Wuhan1与Wuhan2毒株中缺失前8位氨基酸（MDFINIS）,在SY18毒株中第194位氨基酸差异（K差异为I）,并多出第195到201位氨基酸（SFFLTYI）,其余序列区域的同源性仍可达100%。基于收集或预测的ASFV中国流行株p30和p72等蛋白B细胞表位和可溶性预测分析,分别设计ASFV p30重组串联表位蛋白（8个表位）、p72重组串联表位蛋白（8个表位）、p30-p72重组串联表位蛋白（12个表位）、MGF360-505R-CD2v重组串联表位蛋白（19个表位）。ASF病毒蛋白表位及其特性鉴定有助于更好地了解病毒的病理学和宿主免疫反应。2.完成ASFV抗原重组串联表位蛋白（p30、p72、p30-p72和MGF360-505R-CD2v）的表达及鉴定。我们将构建的ASFV中国流行株p ET21-p30、p ET28a-p72、p ET28a-p30-p72和p ET28a-MGF360-505R-CD2v重组质粒使用原核表达系统（大肠杆菌）表达,结果显示p30和MGF360-505R-CD2v串联表位蛋白表达量较高,p30-p72串联表位蛋白表达量良好,p72串联表位蛋白表达量较差;p30、p30-p72和MGF360-505R-CD2v串联表位蛋白均具有一定的可溶性。其中MGF360-505R-CD2v串联表位蛋白包涵体成功纯化。使用真核系统（HEK-293细胞）表达MGF360-505R-CD2v串联表位蛋白,表达量良好且镍柱成功纯化。Western blotting实验进一步鉴定发现,ASF血清抗体可以识别原核系统（大肠杆菌）和真核系统（HEK-293细胞）表达的MGF360-505R-CD2v串联表位蛋白。3.利用MGF360-505R-CD2v串联表位蛋白建立间接ELISA方法。选用原核系统（大肠杆菌）表达的MGF360-505R-CD2v重组串联表位蛋白为包被抗原,进行ELISA Ig G抗体检测方法的建立,系统地确定了抗原蛋白以4ng/μL为最适包被浓度,检测血清（一抗）使用100倍稀释倍数,酶标抗体（二抗）稀释倍数为1:7000,检测血清抗体适宜反应时间为30 min,底物反应时间5min等体系和反应条件。经进一步实验结果证明了该ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,临床样本检测初步应用结果显示,与ID-VET试剂盒综合符合率为92.93%（92/99）,该间接ELISA方法的建立对ASF检测具有一定的参考价值,基于保守表位的血清学检测方法有望提供更广泛的诊断范围。
其他文献
仔猪体内的肠道微生物群被认为是其疾病发生和健康平衡的关键,并且肠道菌群在仔猪的营养、免疫和代谢中有着不可替代的作用,本研究通过对不同日龄的仔猪肠道菌群的分析,来确定不同日龄仔猪肠道菌群组成,并了解新生仔猪不同发育阶段肠道菌群的分布和变化,分析仔猪各个菌群变化以及其变化的原因,探讨不同发育阶段仔猪肠道菌群的差异。试验选取了不同日龄（0、5、10、15、20、25、30 d）健康二元仔猪（大约克×长白
多杀性巴氏杆菌病（Pasteurellosis）是由多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）引起的一种主要引发多种动物和人发生以传染性肺炎和出血性炎症为主要特征的急性、热性传染疾病。当前,多杀性巴氏杆菌疫苗的研究主要包括灭活疫苗、细胞弱毒苗,但因为Pm血清型众多和交叉保护效力低,对动物所能提供的保护效果不太理想,因此由必要研究新的候选疫苗。1、多杀性巴氏杆菌mip基因的克
猪支原体肺炎是一种慢性呼吸系统疾病,被认为是生猪生长发育迟缓的主要原因之一,对养猪业造成了严重的经济损失。目前猪场主要使用弱毒疫苗或灭活疫苗对该病进行预防,但猪肺炎支原体体外培养困难,疫苗生产成本高,且保护性有限,因此迫切需要探索一种免疫性良好的新型疫苗。本研究通过生物信息学技术从猪肺炎支原体232菌株中选出了三个具有高免疫原性的抗原片段,将每个片段重复三次后用柔性连接肽首尾相连,形成一个命名为M
＜正＞2020年前三季度,中欧班列在畅通国内国际双循环中发挥了战略通道作用,累计开行8 751列,同比增长46%,发送集装箱79万标准箱,同比增长51%,前三季度运量已超2019年全年运量。中欧班列单月开行数量连续6个月刷新历史纪录,连续5个月单月开行数量稳定在1 000列以上,单月最高开行数量达1 247列。
科技创新是国家、地区发展的战略核心，科技创新能力的提升关乎经济、社会的发展，科学评价科技创新能力，有助于提升经济效益、推动创新驱动发展战略。通过回顾科技创新能力评价的研究，从评价体系和评价方法2个方面进行梳理，发现不同层面和不同领域的评价体系各有特点和侧重，不同评价方法有其特点和适用范围。通过分析已有研究，发现科技创新能力评价存在评价体系标准不统一、评价方法应用单一、评价领域研究不深入等问题，并进
目的 探讨基于智慧评估预警系统预防肿瘤住院患者跌倒的全程管理模式的应用效果。方法 分别选取2019年1-6月和2021年1-6月某三级甲等肿瘤专科医院所有住院患者作为对照组和观察组。对照组采用常规跌倒预防管理，观察组实施基于智慧评估预警系统预防肿瘤住院患者跌倒的全程管理，比较2组患者跌倒的临床过程指标和跌倒发生情况。结果 观察组风险评估的准确率和干预落实达标率均高于对照组，差异具有统计学意义（P＜
腹泻是一种常见于畜禽生产中的疾病。虽然抗生素能有效保障动物源食品的生产力水平,且能缓解腹泻对畜禽生产带来的危害,但是这成为了抗生素滥用的导火索。植物精油已经被广泛应用在日化、农药、添加剂等方面。石香薷精油具有抗炎抑菌抗氧化等作用,是否会对畜禽腹泻起到干预效果目前尚未报道,其作用机制也未阐明。本文通过对石香薷精油改善小鼠腹泻作用及分子机制研究,初步探讨石香薷精油干预腹泻的作用机制。主要的研究内容和结
复方大黄制剂由大黄、丹参、莪术、黄芩和杜仲组成,用于动物正虚邪实、浊毒内蕴所致食欲不振、恶心为主要表现的肾脏病早期和慢性肾功能不全。本试验通过使用复方大黄制剂对不同类型的肾功能障碍模型大鼠的疗效研究,为兽医临床应用提供试验依据。试验方法:1、复方大黄制剂对大鼠单侧输尿管梗阻和对肾脏部分切除致肾纤维化模型的影响:试验选取雄性SD大鼠140只随机分为12组,20只为空白对照组、20只假手术组,10只为
近年来我国生猪养殖水平不断提高,生猪饲养模式逐渐由散养化养殖过渡到规模化、集约化养殖模式,但饲养管理模式的改变大致生猪在养殖过程容易感染疫病,甚至部分病原可感染人,这对人畜健康造成巨大威胁,同时给养殖场也造成经济损失。猪大肠杆菌属于革兰氏阴性菌,该病原在猪场环境中较为常见,生猪感染大肠杆菌后临床症状复杂,主要包括腹泻、败血症和猪水肿病等,其中产肠毒素性大肠杆菌是导致仔猪腹泻的重要病原,同时该病原对
玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEA）,也称F-2毒素,前期研究表明ZEA可以对机体产生肝毒性,诱导肝细胞的氧化损伤及凋亡。而桦木酸（betulinic acid,BA）是一类可以抵抗炎症、抵抗氧化应激的多酚类物质。目前研究较多的信号通路,如内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）、Nrf2、MAPK等已经被研究证实与机体氧化应激,细胞凋亡等紧密相关,