论文部分内容阅读
目的:探索在模拟失重下空间诱变大肠杆菌(T1-13)感染巨噬细胞RAW264.7后差异表达的microRNAs(miRNAs)及其意义。 方法:⑴以巨噬细胞回转72h模拟失重,并以T1-13与巨噬细胞共培养6h诱导炎症反应,采用第二代测序技术检测失重染菌组、失重组、对照染菌组与对照组巨噬细胞miRNAs的差异表达,筛选出实验组与对照组间差异表达的miRNAs并取交集。⑵利用qRT-PCR技术对差异表达的miR-1224-5p、miR-105进行验证,以U6作为内参,采用相对定量法进行数据分析。⑶结合生物信息学方法利用TargetScan、TarBase、miRDB预测差异miRNAs的靶基因,并对靶基因进行GO功能富集分析、KEGG信号通路分析以及 STRING蛋白互作分析。 结果:实验组与对照组间筛选出108个差异miRNAs(P<0.05;Fold change>2),下调71个,上调37个。qRT-PCR技术对miR-1224-5p和miR-105的表达进行验证,结果与第二代测序基本吻合,与对照组相比,二者在巨噬细胞回转模拟失重后再感染空间诱变大肠杆菌(T1-13)后表达均下调(P<0.05)。生物信息学分析显示,miR-1224-5p和miR-105互补识别的靶基因参与了PI3K-AKT通路、FOXO通路、MAPK通路以及WNT等炎症通路,其中miR-1224-5p的靶基因是MAPK8、MAPK14、PIK3CD、PIK3R1、SP1、STAT1、AKT3、MYC、IL6;miR-105的靶基因是AKT1、TRAF6、MAPK1、MAPK8、PIK3CA、PIK3R1。 结论:模拟失重条件下空间诱变大肠杆菌感染巨噬细胞后miRNAs表达出现显著差异。初步发现miR-1224-5p和miR-105在实验组和对照组间存在显著差异表达,其可能通过调控PI3K-AKT、FOXO、MAPK以及WNT等通路参与失重条件下炎症反应的发生。