本研究在国内外首次构建了大腹园蛛（Araneus ventricosus）主壶腹腺（Major ampullate gland）cDNA文库，并以鸟枪法从中筛选出两个蛛丝蛋白和一个非丝蛋白cDNA新基因。首先剥离大腹园蛛主壶腹腺，提取总RNA和分离纯化mRNA，反转录合成cDNA，凝胶层析除去小于400bp片段，并在双链cDNA两端引入EcoRⅠ的衔接头，对其进行磷酸化处理。同时以EcoRⅠ酶切消化pUC18质粒DNA，CIAP对载体5′端去磷酸化处理。将cDNA与载体连接，并导入DH5α感受态细胞中，构建成cDNA文库。以海选的方式从中筛选具有典型丝蛋白基因重复序列特点的大腹园蛛蛛丝蛋白基因。利用BLAST软件在NCBI已知序列数据库中检索分析同源性。试验结果，该文库容量为4.9×106。从文库中筛选到AvF1和AvF2蛛丝蛋白新基因，具有典型重复序列多，G／C含量高，密码子第三个碱基偏爱使用A／T及编码蛋白中含有大量Gly和Ala残基等特点。AvF1序列1744bp，编码区1572bp，编码氨基酸524个，分子量为42489.55dal。其典型重复结构是（GGP）nGGX。与现有已知的蛛丝蛋白基因中三带金蛛（Argiope trifasciata）鞭毛样丝基因（AtfF）有最高的同源性69.3％。AvF2序列1408bp，编码区为1288bp，编码氨基酸429个，分子量为34070.35dal。其典型重复结构为（GA）nAm（GA）N。与现有已知的蛛丝蛋白基因中十字园蛛（Araneus diadematus）丝蛋白基因ADF1有最高的同源性69.3％。还筛选到非丝蛋白基因Avg1，序列长1253bp，编码区1002bp，编码334个氨基酸，分子量为36953.00dal。NCBI检索未见同源性高的基因序列，但发现含有典型的肽酶结构域，编码蛋白与组织蛋白酶B结构域部分一致性高达90％，其具体功能有待于进一步验证。大腹园蛛主壶腹腺cDNA文库的构建和两个蛛丝蛋白新基因的克隆，为提供大腹园蛛蛛丝蛋白基因背景和进一步研究蛛丝蛋白奠定了基础。