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第一部分喉咽反流病兔动物模型的建立与评价目的:建立和评估喉咽反流兔动物模型并利用此模型研究下食道括约肌功能障碍和反回流性喉炎之间的关系。方法:12只健康新西兰大白兔(2.5-3.5公斤)分成两组。8只行下食道括约肌全切除术以诱导反流。其余的四只行假手术作为对照组。所有动物术前行喉镜检查和24小时食管内pH值检测,术后2周和8周重复以上检查,然后处死所有动物,以获得组织学的结果。结果:下食道括约肌全切除术使实验组动物术后的反流指数(reflux index, R),最长反流持续时间(duration of the longest reflux episode, DLRE)和24小时内总反流次数显著增加。实验组术前和术后2周反流喉镜评分(reflux finding score, RFS)无显着性差异(P=0.11)。但实验组术前和术后8周RFS由4.6+0.9上升到8.3+3.6,有显着性差异(P=0.02)。实验组与对照组相比,粘膜下腺体增生和炎症反应有显著性差异。结论:本研究结果显示,在兔动物模型中慢性食管下段括约肌功能障碍可导致反流性喉炎。第二部分 喉咽反流病兔动物模型食道及声带粘膜细胞间隙的研究目的:本研究中,我们利用反流动物模型研究了兔喉和食道上皮在透射电镜下的组织学变化,从而揭示喉咽反流(laryngopharyngeal reflux, LPR)和胃食管反流(gastroesophageal reflux, GER)的关系以及扩张的细胞间隙(dilated intercellular space,DIS)可否作为LPR形态标志。方法:8只新西兰大白兔分为2组。4只兔子行下食道括约肌全切除术以诱导反流。余下4只行假手术,作为对照组。所有动物术后12周后处死以获得组织学及电镜结果。结果:实验组和对照组的食道和喉组织学结果有显著性差异(P=0.041和0.014)。与对照组相比,实验组食道和喉上皮细胞间隙(intercellular space,IS)有显著性差异(P<0.001)。结论:本实验的结果提示LPR和GER有相似的发病机制,而且DIS可作为兔LPR模型的形态学指标。与对照组相比,实验组食道和喉上皮细胞间隙(intercellular space,IS)有显著性差异(P<0.001)。第三部分紧密连接蛋白Claudin-3和Occludin在反流动物模型中的表达目的:建立和评估喉咽反流大鼠动物模型并利用此模型研究喉内claudin-3和occludin表达和喉咽反流之间的关系。方法:8只健康大白鼠(250-300 g)分成两组。4只行下食道括约肌全切除术以诱导反流。其余的四只行假手术作为对照组。所有动物术后12周处死,以获得组织学的结果。应用Western blot和免疫荧光检测食道及喉粘膜样本中claudin-3和occludin的表达。结果:实验组食道和喉内粘膜淋巴细胞浸润有显著增加(P=0.001和0.002)。实验组食道和喉内粘膜claudin-3表达水平明显低于对照组(P=0.045,0.037);occludin表达无明显差异。结论:本实验结果提示在喉咽反流大鼠模型中,claudin-3表达的降低对于反流性喉炎有敏感的指示意义。