论文部分内容阅读
第一部分 强直性肌营养不良症(DM)致病新位点的阶段性研究 背景与目的 强直性肌营养不良症(DM)是成年人肌营养不良中最常见的一种,症状具有多系统受累的特点,致残率高。迄今DM已经发现两个基因变异位点,分别命名为DM1及DM2,DM1为位于19 q13.2-13.4区域上肌强直性营养不良蛋白激酶(DMPK)基因3′端非翻译区内三寡核苷酸串CTG的异常扩增,DM2为位于3q21区域锌指蛋白9(ZNF9)基因内含子1内四寡核苷酸串CCTG的异常扩增。国内外研究表明可能存在DM致病新位点(DM3)。本研究拟通过某DM大家系来论证是否存在DM致病新位点及探讨可能的致病新位点的位置。 方法 以中国上海地区一个较大的DM家系的31名成员为研究对象,在前期部分工作的基础上,抽取血样后依次运用下列方法进行研究: 1) PCR扩增结合Southern杂交的方法对该家系的DM1、DM2位点进行检测; 2) 再次进行DM1及DM2位点PCR扩增,PAGE电泳检测; 3) 对该家系的部分成员血样进行DM1位点克隆和测序检测; 4) 在DM1和DM2位点未显示异常之后,先后两次采用全基因组扫描技术为平台的连锁分析方法,运用计算机软件计算LOD值,以判定某些可能与DM连锁的新基因位点(DM3)。 结果 1) 该家系31名成员的血样经以上前三种方法检测其DM1及DM2位点均为正常,即未显示寡核苷酸串CTG或CCTG的异常扩增; 2) 全基因组扫描并参数型连锁分析表明,该家系成员血样DNA上DM1及DM2位点两侧微卫星标记处的LOD值均小于0.3,在D1S484、D2S486、D5S641、D5S471、D5S436、D6S434、D12S79、D14S70、D14S292位点得到的LOD值分别为1.9393