妥布霉素的分离纯化工艺研究

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妥布霉素是由黑暗链霉菌发酵产生的一种氨基糖苷类抗生素,能够对革兰氏阴性菌有明显的抑制作用的一类广谱性抗生素,临床上常被用于治疗败血症、尿路感染、下呼吸道感染、眼睛和中枢系统感染、以及严重的皮肤感染包括烧伤,能够对大庆霉素有具有耐药性的部分绿脓杆菌具有很强的抑制作用,且与庆大霉素的肾毒性相比,妥布霉素具有更少的毒性。妥布霉素和卡那霉素B是由暗霉素水解产生,妥布霉素在结构上仅比卡那霉素B在C3’上少了一个羟基,很难将它们分离。目前对妥布霉素多使用弱酸阳离子树脂通过多步重复纯化得到,每步纯化都会造成妥布霉素的损失,增加生产成本并且回收率低。本论文将探讨使用最少的纯化步骤来达到预期的产量和纯度的新工艺。开发利用离子交换树脂混用技术分离纯化妥布霉素的工艺。以树脂吸附量和解吸量以及妥布霉素纯度为指标,从10种不同类型的树脂筛选出HZ-3C和JK110分离纯化妥布霉素,对两种树脂的吸附动力学和吸附等温线进行研究,50min内吸附达到平衡,准一级动力学方程能够很好的描述JK110对妥布霉素的吸附过程,准二级动力学方程能够很好的描述HZ-3C对妥布霉素的吸附过程,HZ-3C和JK110对妥布霉素的吸附等温线能够使用langmuir吸附模型进行拟合。确定最优工艺条件如下:确定两种树脂最佳比例为3:1,上样pH值为9.0,上样流速为3BV/h,使用浓度0.20%和0.35%氨水溶液进行梯度洗脱。采用优化后的条件,妥布霉素纯度从32.85%提高到94.82%,回收率为88.26%。通过对四种不同金属配基的金属鳌合亲和层析介质对妥布霉素的吸附和解吸性能进行研究,筛选出D401-Cu(Ⅱ)的分离纯化效果最好。静态吸附实验中确定最佳pH值为9.8,吸附动力学规律能够用准二级动力学方程表示,吸附等温线符合Langmuir吸附等温方程。通过动态吸附实验,确定最佳吸附条件如下:D401-Cu(Ⅱ)与D401的最佳配比为1:1,上样浓度为5.76mg/mL,上样流速为4BV/h,最佳洗脱条件为:使用浓度0.3%和0.7%氨水溶液进行梯度洗脱,洗脱剂用量均为6 BV。采用优化后的工艺,妥布霉素纯度从32.85%提高到92.18%,回收率为97.46%,表明D401-Cu(Ⅱ)能够用于分离纯化妥布霉素。
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