CD4和CD8双阴性T细胞在治疗胰腺癌中的相关机制研究

来源 :安徽医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ESC_liangzi
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【目的】研究CD4和CD8双阴性T细胞(double negative T cell,DNT cell)对胰腺癌细胞的毒性作用以及DNAM-1(CD226)/CD155信号通路是否参与了对胰腺癌的杀伤作用,并且研究了CD155蛋白在胰腺导管腺癌组织中的表达情况,为双阴性T细胞以后应用于临床治疗胰腺癌患者的可能性提供思路。【方法】使用抗体吸附法对健康者血中的双阴性T细胞进行提纯及扩增。在体外通过CCK-8法研究双阴性T细胞对胰腺癌细胞的杀伤作用,通过人重组蛋白阻断实验研究DNT细胞对胰腺癌细胞的毒性作用机制,并采用TUNEL法检测胰腺癌细胞凋亡情况。建立胰腺癌裸鼠种植瘤模型,将裸鼠平均分成DNT细胞治疗组、吉西他滨治疗组和空白对照组,研究双阴性T细胞在体内对胰腺癌细胞的杀伤作用机制。通过免疫组织化学法检测CD155蛋白在胰腺导管腺癌中的表达情况,分析CD155蛋白与胰腺癌患者临床病理特征之间的关系。【结果】外周血中双阴性T细胞通过抗体吸附法有效扩增及培养后其细胞纯度达到96.4%。本研究表明体外共培养实验中,双阴性T细胞能够对胰腺癌细胞的生长产生抑制(P=0.0005),并且双阴性T细胞与胰腺癌细胞共培养后,DNAM-1/CD155信号通路中相关蛋白CD155、颗粒酶B及穿孔素的表达量在胰腺癌细胞中增加。当加入DNAM-1受体阻断剂DX11预处理双阴性T细胞后,DNT细胞对胰腺癌细胞的毒性减弱,其相关蛋白CD155、颗粒酶B及穿孔素的表达均下降,与未用DX11处理相比,有明显差异(P=0.037)。在胰腺癌裸鼠种植瘤体内实验中,本实验结果显示空白对照组中种植瘤瘤体的体积及重量均高于双阴性T细胞组和吉西他滨组,差异有统计学意义(P<0.01),而两组治疗组瘤体的重量及体积未见明显差异。DNT细胞治疗组及吉西他滨治疗组瘤体中DNAM-1/CD155通路相关蛋白CD155、颗粒酶B和穿孔素的表达量均比空白对照组增加。免疫组织化学实验结果显示胰腺导管腺癌组织中CD155蛋白的表达要比癌旁组织高,差异具有统计学意义(χ2=13.60,P<0.01),并且CD155蛋白的表达程度与胰腺导管腺癌的分化程度(P<0.001)、神经浸润(P<0.001)、淋巴结转移(P=0.001)有关。【结论】双阴性T细胞对胰腺癌细胞具有杀伤作用,能够在体内外抑制胰腺癌细胞的生长,并且DNAM-1/CD155信号通路可能参与了对胰腺癌细胞的毒性作用。研究发现CD155蛋白在胰腺导管腺癌组织中的表达高于癌旁正常组织,且CD155蛋白的表达的升高与胰腺导管腺癌的分化程度、神经浸润及淋巴结转移有相关性。
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