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目的研究表明,SDF-1/CXCR4轴不仅能够促进移植后的BMSCs向损伤组织迁移,而且具有抑制BMSCs凋亡、增加BMSCs的存活率及增强BMSCs增殖活性等作用,从多方面提高BMSCs向损伤组织的归巢效率。因此我们设想通过转基因技术将外源性SDF-1基因导入BMSCs,提高SDF-1在BMSCs的表达率,从而增强BMSCs的迁移能力。方法1.构建过表达SDF-1α重组慢病毒载体(p NL-SDF-1α-IRES2-EGFP),进行PCR、双酶切及测序鉴定;2.将已经构建好的慢病毒载体质粒p NL-SDF-1α-IRES2-EGFP、p NL-IRES2-EGFP、GV-118-SDF-1α-si RNA与其辅助质粒共同转染293T细胞,包装生产慢病毒,并进行病毒浓缩和功能滴度测定;用相同滴度的过表达SDF-1α慢病毒、空载体慢病毒、SDF-1α基因沉默慢病毒转导BMSCs,建立稳定过表达SDF-1α的骨髓间充质干细胞系;采用RT-PCR、Western Blot的方法检测三组中SDF-1αm RNA和蛋白的表达水平;3.Transwell迁移实验检测SDF-1α对BMSCs迁移的影响;抗SDF-1α多抗阻断后观察细胞迁移的变化。结果1、成功构建SDF-1α重组慢病毒载体(p NL-SDF-1α-IRES2-EGFP质粒)。2、慢病毒转染48h后可在倒置荧光显微镜下观察到大量293T细胞表达EGFP,EGFP阳性率可达95%以上,转SDF-1α基因、空载体及SDF-1α基因沉默BMSCs强烈表达EGFP。RT-PCR、Western Blot证实SDF-1α-BMSCs组过表达SDF-1α,si RNA-BMSCs组SDF-1α表达明显被抑制。3、Transwell迁移实验提示SDF-1α可明显促进BMSCs的跨膜迁移。SDF-1α-BMSCs组及null-BMSCs组在抗SDF-1α多抗作用后迁移指数明显下降,而si RNA-BMSCs组抗体阻断后与阻断前无明显差异。结论利用成功构建过表达SDF-1α基因及SDF-1α基因沉默慢病毒载体包装生产慢病毒,进而感染BMSCs,通过RT-PCR、Western Blot检测SDF-1αm RNA、蛋白的表达水平,证实过表达SDF-1α能增强BMSCs中SDF-1α基因表达,而SDF-1α基因沉默能抑制BMSCs中SDF-1α基因表达,Transwell迁移实验表明,过表达SDF-1α促进BMSCs跨膜迁移,而SDF-1α基因沉默后这种迁移明显被抑制。加入抗SDF-1α后,BMSCs跨膜迁移的细胞数明显减少。