论文部分内容阅读
目的:臂丛神经根性撕脱伤后脊髓神经元大量死亡，神经再生缺乏“原动力”，严重影响术后肢体功能的恢复。促红细胞生成素（EPO）是调节红细胞生成的常用药物，也对多种中枢及外周神经系统损伤有治疗作用。本研究旨在，利用全臂丛神经撕脱伤模型，研究伤后即刻，皮下注射低剂量EPO对根性撕脱伤后神经元的保护效果、副作用及其与JNK/c-Jun凋亡信号通路间的关系。方法:成年Wistar雄性大鼠180只，随机等分为对照组（C组，根性撕脱+隔日皮下注射生理盐水1mL）和促红细胞生成素组（EPO组，根性撕脱伤+隔日皮下注射EPO1000U/kg）。两组分别在术前（0天）、术后1、2、4、7和14天留取脊髓C5-T1段。H-E，尼氏体染色法观察神经元状态；TUNEL和c-PARP检测神经元凋亡情况；免疫组化法，Western blot和Realtime PCR分别检测p-JNK和c-Jun在脊髓神经元内的蛋白及mRNA表达变化。结果:1．存活神经元计数：与损伤前相比，C组和EPO组损伤后1、2、4天神经元数量均无明显变化，7、14天数量急剧减少。两组比较，EPO组存活神经元数量在第7、14天明显高于C组。2．脊髓神经元TUNEL情况： C组和EPO组伤后第2~14天可见凋亡细胞。两组比较，EPO组TUNEL阳性IOD值低于C组，在第4、7天差异具有统计学意义。3．脊髓神经元c-PARP含量：其免疫组化的IOD值，与损伤前相比，伤后第2~14天升高明显，C组第4天达峰值，EPO组第7天达峰值。两组间比较，第2、4天，EPO组明显低于C组。4．两组血常规组间比较：相同时间点，EPO组与C组的血红蛋白量、红细胞数、血细胞压积，均无显著性差异。5．脊髓神经元c-Jun蛋白及mRNA：组内比较，撕脱后第2~7天升高明显，第2天达到峰值。组间比较，EPO组第2~7天，c-Jun明显低于C组。6．脊髓神经元p-JNK蛋白表达：组内比较，撕脱后1~7天升高明显，第2天达峰值。组间比较，EPO组第1~4天，p-JNK含量明显低于C组。7．梯度离心法能够提高脊髓神经元的提取数量和特异性，为后续的实验奠定基础。结论:1．改良全臂丛神经根性撕脱伤动物模型撕脱确切、副损伤小、符合实际致伤机制；2．臂丛神经根性撕脱伤可导致脊髓神经元凋亡，EPO可减少神经元凋亡、增加神经元存活数量，发挥其保护神经的作用；3．臂丛神经根性撕脱伤后可引起脊髓相应节段神经元p-JNK，c-Jun蛋白表达上调，而应用EPO则可抑制神经元内该蛋白的表达；4．隔日皮下注射EPO1000U/kg几乎不影响血常规结果。