论文部分内容阅读
血管性抑郁症是一种与脑血管疾病或血管危险因素相关的老年期抑郁综合征。与人口老龄化和心脑血管疾病发病率增加正相关,在65岁以上老年人中,重型抑郁约占3.7%-10%。血管性抑郁症的主要病理改变为脑白质损害,其发病机制可能与慢性缺血及应激引起神经血管单元失稳态及重构障碍相关。血管性疾病与抑郁症互相影响,严重影响患者的治疗和预后,且本病患者由于年龄较大并伴有各种躯体疾病,对抗抑郁西药的反应较差,起效所需时间较长,而且有增高复发率和再燃的风险。导师黄世敬在继承和挖掘名老中医经验基础上,结合前期研究及血管性抑郁症的临床特征,根据王永炎院士提出的“虚气留滞”病机理论,提出本病主要病机为元气亏虚、气血郁滞,以“益气开郁”为基本治法,选用开心解郁方为基本方治疗本病。本研究旨在从神经血管单元失稳态方面,研究血管性抑郁症病机元气亏虚、气血郁滞的分子机制与开心解郁方对神经血管单元的重塑机制。从深层次阐释名老中医经验,揭示血管性抑郁症病机治法的科学内涵,为中医药防治血管性抑郁症拓展新思路和提供有效方药。研究目的：观察血管性抑郁症模型大鼠行为学及脑血流改变,检测大鼠大脑皮层内组织型纤溶酶原激活物(tissue plasminogen activator, t-PA)及纤溶酶原激活物抑制剂(?)-1(Plasminogen activator inhibitor-1, PAI-1)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)及基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9);大鼠海马组织内脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor, BDNF)及其受体酪氨酸激酶受体B (Tyrosine kinase B, TrkB)蛋白的表达变化及开心解郁方的影响,探讨血管性抑郁症的发病机理及开心解郁方的作用机制。研究方法：1.动物分组及处理：160只健康成年雄性SD大鼠,体重240-260g,适应环境3天后进行行为学评分,选取得分相近的大鼠,进行随机分组。(1)假手术组,同手术组处理,但不结扎。(2)抑郁组：慢性不可预见性温和应激(chronic unpredictable mild stress, CUMS)结合孤养致慢性应激抑郁模型,不进行手术；(3)手术组：双侧颈总动脉结扎(ligation of bilateral common carotid arteries, LBCCA),将LBCCA造模成功者,随机再分为6组：①LBCCA组：双侧颈总动脉结扎；②血管性抑郁组LBCCA叠加CUMS,结合孤养；③中药组：血管性抑郁组基础上,加中药开心解郁方灌胃,分高中低三个剂量组；④西药组：血管性抑郁组基础上,加西药盐酸氟西汀灌胃,CUMS、孤养及灌胃给药于术后第8日开始进行。2.给药方法：灌胃给药,开心解郁方水煎浓缩剂,成人每日公斤体重用量的6倍定为等效剂量中剂量,给予开心解郁方4.25ml/kg(相当于生药6.3g/kg)灌胃；高剂量组给予8.5ml/kg灌胃；低剂量组为2.125ml/kg灌胃；西药组给予盐酸氟西汀2.0mg/kg·d。假手术组、抑郁组和模型组给同等体积蒸馏水,CUMS开始时同时给药,连续灌胃给药21天。3.观察指标3.1行为学：糖水偏嗜实验及旷场实验,均于于术前、术后7天及28天进行测定；3.2测定脑血流(Cerebral Blood Flow, CBF)3.3免疫组化和RT-PCR技术测定大鼠大脑皮层t-PA/PAI-1、MMP-2/MMP-9蛋白及mRNA表达水平的变化。3.4免疫组化和RT-PCR技术测定大鼠大脑海马组织BDNF/TrkB蛋白及mRNA表达水平的变化。研究结果：1.行为学：与假手术组比较,模型组大鼠和抑郁组在造模后糖水消耗百分率(P<0.05)、旷场试验运动距离(P<0.01)及站立次数明显降低(P<0.05)；与模型组比较,西药组,中药高剂量组能显著增加抑郁大鼠糖水消耗百分率和旷场试验运动距离(P<0.05,P<0.01)；中药中剂量组有改善趋势,无统计学差异。2.脑血流：中药开心解郁方可增加慢性脑缺血大鼠大脑血流量(P<0.05)；3.皮层t-PA/PAI-1、MMP-2/MMP-9蛋白含量及其mRNA水平的变化：与假手术组相比,血管性抑郁模型大鼠t-PA表达水平降低(P<0.05),而PAI-1表达增高(P<0.05)；MMP-2表达水平显著增高(P<0.01)。与血管性抑郁模型组比较,中药高剂量组及西药组可显著降低MMP-2表达(P<0.01),中药高剂量组能升高t-PA表达水平并降低PAI-1表达(P<0.05),西药氟西汀作用不明显；MMP-9各组间无显著性差异。4.海马组织BDNF/TrkB蛋白含量及其mRNA水平的变化：与假手术组比较,血管性抑郁模型大鼠及抑郁模型大鼠海马内BDNF及(?)rk B含量均明显降低(P<0.01,P<0.05),手术组无显著性差异；与模型组比较,中药高剂量组可显著增加海马内BDNF及Trk B含量(P<0.01),中剂量组及低剂量也有改善作用。西药氟西汀可增加BDNF表达,对TrkB无明显作用。研究结论：1LBCCA叠加CUMS结合孤养的血管性抑郁模型较好的模拟了慢性抑郁状态的症状表现：快感缺乏、运动能力和探索能力下降。2.开心解郁方可以明显改善血管性抑郁症模型大鼠的抑郁状态并改善其慢性脑缺血状态；3.血管性抑郁模型大鼠脑皮层组织t-PA表达水平降低而PAI-1表达升高,MMP-2表达水平增加,海马组织BDNF及Trk B表达水平下降,可能与血管性抑郁症发病相关；4.开心解郁方可升高模型大鼠脑皮层t-PA表达水平并降低PAI-1表达,有助于神经元的修复,并可降低MMP-2的表达水平,减少脑缺血损伤,有助于改善血管性抑郁慢性缺血损伤及抑郁状态；5.开心解郁方可以上调海马区BDNF及Trk B表达水平,可能为其治疗血管性抑郁症的疗效机制之