双醋瑞因对大鼠实验性牙周炎的治疗作用

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目的:通过对雄性wistar大鼠牙周结扎的方法建立牙周炎动物模型,观察双醋瑞因对牙周炎大鼠的治疗作用,为双醋瑞因作为牙周炎的药物治疗提供实验性依据。方法:选用纯种3月龄雄性wistar大鼠40只,随机分成四组:正常组10只、牙周炎组10只、4周用药组10只、8周用药组10只。牙周炎、牙周炎用药组在10%水合氯醛腹腔(330mg/kg)麻醉下,用直径为0.2mm的正畸不锈钢结扎丝双侧结扎上颌第一磨牙,将结扎丝放入游离龈内,不能损伤牙龈结合上皮,结扎当天,即用高糖水代替饮用水喂养。牙周炎造模一个月后,随机抽取正常组和牙周炎组大鼠,处死,取其上颌骨,制作上颌第一磨牙牙体牙周联合切片,组织学观察,鉴定牙周炎模型。牙周炎模型鉴定成功后,用药组用双醋瑞因胶囊用2ml生理盐水按100mg/kg配制成为混悬液,每天一次2ml灌胃;牙周炎则每天一次2ml生理盐水灌胃。服药4、8周后,随机抽取大鼠各10只,股动脉放血处死,留全血备用,取大鼠上颌骨,立即放入10%甲醛溶液中固定,24h后采用10%的EDTA溶液脱钙60天,制作牙体牙周联合组织切片,进行HE染色,光镜观察;抗酒石酸酸性磷酸酶染色,观察破骨细胞的分布及数量情况并作统计学分析处理;IL-1β免疫组织化学染色,观察IL-1β的表达,对观察结果进行统计学分析。结果:1牙周结扎后,牙周炎组与用药组大鼠食欲减退,精神状态不佳,体重较正常组减轻;造模一周后,大鼠饮食逐渐恢复正常,精神状态良好。牙周炎造模成功后,牙周炎组及用药组开始分别灌胃生理盐水、双醋瑞因,用药组大鼠出现轻度腹泻的症状,尿量增加,尿液颜色偏黄,进食较少,精神较萎靡,一周后腹泻症状减轻,精神逐渐恢复正常。灌胃8周后,各组大鼠体重均有增加,正常组幅度最大,牙周炎组最小。2造模4周后,取其上颌骨,肉眼观察,正常组无明显炎症反应,探诊无出血;牙周炎组则表现为牙龈红肿,探诊出血明显,牙龈与牙面不贴合,食物残屑堆积,形成较浅的牙周袋。制作上颌第一磨牙牙体牙周联合组织切片,显示正常组牙周结构完整,无炎症反应。牙周炎组牙周炎症明显,牙龈上皮内有大量炎性细胞浸润,结合上皮与牙根结合不紧密,向根方移位,牙周膜内毛细血管扩张出血,牙槽嵴顶有少量吸收。说明牙周炎模型建立成功。3大鼠牙周组织HE染色组织形态学观察:正常组:结合上皮位于釉牙骨质界处,无炎症细胞浸润,牙周膜纤维有序排列,牙槽嵴顶无明显吸收。牙周炎组:结合上皮向根方移位,周围有大量的炎性细胞浸润,形成较深的牙周袋,毛细血管扩张出血,牙周膜间隙增宽,牙周膜纤维排列紊乱,牙槽嵴顶吸收明显。4周用药组:牙周袋变浅,上皮下方仍有炎性细胞浸润,牙槽嵴顶见少量成骨细胞,牙槽嵴顶周围见少量破骨细胞。8周用药组:牙周袋变浅,牙槽嵴顶见大量成骨细胞,有新骨形成。4抗酒石酸酸性磷酸酶染色法(TRAP)测定大鼠牙周组织中破骨细胞的分布和表达水平:正常组:牙槽嵴顶边缘可见个别散在分布的破骨细胞。牙周炎组:牙槽嵴周围见大量的破骨细胞密集分布。4周用药组:破骨细胞仍少量分布于牙槽嵴顶周围。8周用药组:牙槽嵴顶周围破骨细胞罕见。观察牙槽嵴顶冠1/3区域破骨细胞分布并进行统计分析,牙周炎组明显高于正常组及用药组(P<0.01),8周用药组与正常组未见明显差异(P>0.05),4周用药组高于8周用药组(P<0.01)。5免疫组化测定IL-1β在大鼠牙槽骨中的分布及表达水平,IL-1β存在上皮细胞、中性粒细胞、单核-巨噬细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞等细胞胞浆及牙周膜基质,正常组:阳性细胞少,牙周炎组:成纤维细胞的胞浆,炎性细胞灶呈强阳性表达,4周用药组:成纤维细胞等呈阳性表达,8周用药组:阳性细胞少,呈弱阳性表达。光密度值测定牙周炎对照组明显高于正常组和用药组(P<0.01),正常组与8周用药组之间无明显差异(P>0.05),4周用药组高于8周用药组(P<0.01)。结论:1通过结扎大鼠上颌第一磨牙成功地建立了大鼠牙周炎的模型。2双醋瑞因胶囊显著降低了IL-1β的表达,减轻了牙周局部炎症,抑制大鼠牙周组织中破骨细胞的形成,诱导成骨,促进了牙槽骨新骨的形成,对牙周炎有治疗作用。
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