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目的:比较2型糖尿病患者服用达格列净后临床指标变化及利用非标(label free)定量蛋白质组学方法鉴定血清差异蛋白的表达情况,并用ELISA验证差异蛋白,且对糖化血红蛋白达标(HbA1c<7.0%)的达格列净用药后组、沙格列汀用药后组、二甲双胍用药后组以及单纯饮食运动组之间的血清差异蛋白及临床相关指标进行比较分析,来寻找与2型糖尿病的治疗及疾病进展中参与糖脂代谢等机制相关的新的差异蛋白。方法:选取2017年1月1日至2018年12月1日就诊于内蒙古医科大学附属医院内分泌科的HbA1c介于7.0~10.0%的2型糖尿病患者20例作为试验组,同期选入年龄、BMI相匹配的HbA1c<7.0%只服用沙格列汀或二甲双胍治疗的2型糖尿病患者各20例以及单纯饮食运动控制未用药的2型糖尿病患者20例作为对照组。试验组给予口服达格列净治疗(10mg/片,1片/天)治疗3个月,HbA1c<7.0%为达标。服用沙格列汀、二甲双胍入组者为近3月内只规律服用沙格列汀、二甲双胍;单纯饮食运动控制组为近3月内未服用任何降糖药只通过饮食运动控制血糖者。收集达格列净治疗前、后组及沙格列汀组、二甲双胍组、单纯饮食运动组的血标本,血标本测定的临床指标包括空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、肝功、肾功、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、空腹胰岛素(FINS)、空腹C肽(FCP)、视黄醇结合蛋白4(RBP4)、同型半胱氨酸(HCY)、C反应蛋白(CRP)、游离脂肪酸(NEFA)。从达格列净试验组中根据异质性均一原理选取5例患者治疗前后的血清样本进行非标(label-free)定量蛋白质组学技术筛选出差异蛋白,然后将具有临床意义且与2型糖尿病密切相关的α-L血浆盐藻糖苷酶(AFU)、αⅡb整合素及足细胞标记蛋白(PCX)在试验组及对照组血清样品中进行ELISA验证,对比试验组与对照组的差异蛋白表达情况,并结合收集的相关临床资料进行用药前后比较和组间分析。同时将定量到的差异蛋白经数据库检索后进行生物信息学方面的分析,具体包括从生物进程、细胞组成和分子功能方面进蛋白注释、差异蛋白功能分析以及对差异蛋白的亚细胞结构进行定位分析。结果:(1)临床资料分析比较:达格列净用药后与用药前相比,体重、BMI、腰围及腰臀比减低(P<0.05);血糖相关指标FBG、HbA1c、FCP、FINS、HOMA2-IR下降(P<0.05),HOMA2-S%、HOMA2-β升高(P<0.05);脂代谢相关指标TC、非HDL-C下降(P<0.05),ApoA1升高(P<0.05);其它相关指标,视黄醇结合蛋白(RBP)、血同型半胱氨酸(HCY)、游离脂肪酸(NEFA)降低(P<0.05),尿糖、尿酮体升高(P<0.05)。达格列净用药后与沙格列汀用药后相比,腰臀比、HCY、RBP4、FINS下降(p<0.05),HOMA2-β升高(p<0.05);与二甲双胍用药后组比较,HCY、RBP4、FINS下降(p<0.05),HOMA2-S%、HOMA2-β升高(p<0.05);与单纯饮食运动达标组比较,HCY、RBP4、FINS下降(p<0.05),ApoA1、HOMA2-S%升高(p<0.05)。(2)达格列净治疗前后血清差异蛋白表达情况:从5例患者选取异质性均一的的血清标本行非标(label free)定量蛋白质组学后筛选出AFU、αⅡb整合素、PCX等19个差异蛋白位点,其中AFU、αⅡb整合素等18个差异蛋白在服用达格列净后表达下调,1个差异蛋白PCX表达上调。(3)ELISA验证结果:20例试验组患者达格列净用药后与用药前比较,AFU、αⅡb整合素表达下调(P<0.05);PCX表达上调(P<0.05)。达格列净用药后组与沙格列汀用药后组比较,PCX蛋白上调(P<0.05);与二甲双胍用药后组比较,AFU、PCX蛋白上调(P<0.05);与单纯饮食运动达标组比较,AFU表达下调(p<0.05)。(4)生物信息学分析结果:蛋白注释结果,差异蛋白在生物进程分类中,细胞过程类别所占比例最多;在细胞组成分类中,差异蛋白多在细胞器中表达;在分子功能分类中,绑定分子功能类别所占比例最多。亚细胞结构定位方面,差异蛋白主要位于细胞质、细胞核等结构。功能富集方面,发现同型细胞间粘附通路、免疫反应的淋巴细胞活化通路及肌动细胞骨架等通路中显著富集。结论:(1)达格列净降糖效果明显,在降糖的同时还对患者的体重减轻、脂代谢改善及胰岛功能改善等方面均有很好的作用。(2)利用非标(label free)定量蛋白质组学技术,发现2型糖尿病患者经达格列净后治疗后血清蛋白表达水平存在差异,其中下调的差异蛋白为AF U、αⅡβ整合素等18个蛋白,上调的差异蛋白为PCX蛋白。ELISA验证AFU、αⅡb整合素、PCX差异蛋白的确存在于研究各组的所有样本中。通过差异蛋白的注释及功能富集可了解差异蛋白的基本信息及参与的代谢通路,这些通路是否为达格列净治疗机制仍需验证。(3)AFU、αⅡβ整合素及PCX的变化可能与氧化应激、胰岛素抵抗及脂代谢等途径相关,其中达格列净用药后PCX表达上调,推测达格列净通过调节PCX蛋白表达发挥肾脏保护作用,其具体机制还需进一步研究。这些推测可为达格列净降糖机制方面的研究提供更多思路,为临床用药提供指导作用。