蓝果忍冬(Lonicera caerulea L.)组培快繁技术的研究

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组培工作者多次对单一品系的蓝果忍冬进行了研究,结果存在差异,并不完全相同,所以本试验于2012年11月底从东北农业大学设施工程中心蓝果忍冬资源圃采集选取了4个不同的蓝果忍冬品系进行研究,分别是来自俄罗斯的“蓓蕾”、“蓝鸟”(L.Kamtschatica Pojark.)和来自中国的“长白山1号”(L.caerulea var.edulis)、“阿尔泰1号”(L.caerulea var.altaica)。取冬萌芽为试验材料,筛选合适的外植体;采用不同的75%酒精、2%NaClO和0.1%HgCl2消毒剂组合和灭菌时间获得无菌材料:在WPM、MS、H、B5、N6、White常用培养基中筛选最适基础培养基:通过对6-BA.ZT.GA3不同激素组合配比,筛选生长培养基的有利激素;利用正交试验设计筛选有效的生根培养基;探索不同温度、相对空气湿度条件和基质对驯化和移栽的影响,研究来自不同地域不同品系,蓝果忍冬组培快繁技术的异同点,建立单个品系的组培快繁体系。主要研究结论如下:(1)外植体的筛选:不同地理区域的品系不存在明显的差异,不同品系的蓝果忍冬适合做组织培养的外植体部位,基本相同,均可采用茎尖(1.OOcm左右)、茎段为外植体。其中,茎段可产生丛生芽,茎段(个):丛生芽(个)=1:3或4,茎尖(个):丛生芽(个)=1:1,茎段可通过丛生芽切割方式继续培养;其中“蓝鸟”(L.Kamtschatica Pojark.)茎段的培养效果的成活率明显低于其他三个品系,污染率较高,所以“蓝鸟”(L.Kamtschatica Pojark.)最好取茎尖为外植体。(2)灭菌条件的筛选:不同地理区域间没有必然的联系,不同品系的蓝果忍冬同种外植体,所需要的灭菌条件并不完全相同,总体来说,蓝果忍冬茎尖外植体的最佳处理方法为:75%酒精(30s)→3次无菌水冲洗→0.1%氯化汞(6min)→6次无菌水冲洗(每次不少于1min)。(3)基础培养基的选择:4个品系都可用WPM和MS做基础培养基,成活率明显高于其它培养基,“蓓蕾”、“蓝鸟”、“阿尔泰1号”WPM成活率较高于MS,所以选用WPM为基础培养基。其中“长白山1号”也可用MS培养基,与WPM培养基培养效果无显著差异。(4)生长培养基的选择:1.Omg·L-16-BA对4个品系组培苗的增长均有显著影响,可有效的促进组培苗的生长,所以对于4个不同品系的蓝果忍冬来说,最佳的生长培养基为:WPM+1.0mg·L-6-BA。(5)生根培养基的选择:IBA在生根环节中起到了促进作用,不同品系之间存在浓度差异。6-BA促进组培苗的生长,1.0mg/L为最适浓度,GA3对生根率的影响不是很大,因品系不同有差异。除“蓝鸟”外,其他三个品系1/2WPM的生根率高于1/4WPM。“蓓蕾”的生根培养基为:1/2WPM+1.0mg·L-16-BA+0.5mg·L-6IBA:“蓝鸟”的生根培养基:1/4WPM+1.0mg·L-16-BA+0.5mg·L-1IBA+1.0mg·L-1GA3;“长白山1号”的生根培养基:1/2WPM+1.0mg·L-16-BA+1.0mg·L-1IBA:“阿尔泰1号”的生根培养基:1/2WPM+1.0mg.L-16-BA+0.5mg·L-1IBA+0.5mg·L-1GA3。(6)驯化移栽条件的摸索:不同地域间的蓝果忍冬不存在明显的差异性,不同品系的驯化和移栽条件基本相同。“蓓蕾”、“阿尔泰1号”驯化的相对空气湿度为70%-80%,室温20℃:“蓝鸟”、“长白山1号”要求相对空气湿度80%,室温20℃。严格的控制温度和相对湿度是驯化和移栽过程中的首要条件,其次移栽时要注意冲洗培养基,以免遭致有害微生物的入侵,最后将已生根的组培苗移栽到草炭土:沙=1:1基质中,温度20℃,湿度为80%培养25d,可形成正常植株。
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