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第一部分成年兔脂肪间充质干细胞分离、培养、鉴定及成软骨诱导目的研究脂肪间充质干细胞体外培养生物学特性。建立其分离和培养的方法并探讨其向软骨细胞诱导分化的能力方法成年新西兰大白兔取腹股沟及颈部脂肪，胶原酶消化分离。用含9-10%胎牛血清的高糖DMEM培养基培养传代。在倒置显微镜下观察细胞增长的形态。对3.7代细胞行MTT测定其增值能力。对3代细胞行软骨诱导分化。观察倒置显微镜观察下细胞的增长情况。诱导分化1周后进行细胞番红0染色，RT-PCR测定软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA表达。结果原代脂肪间充质干细胞培养2天后开始贴壁生长，呈现梭形及多角细胞生长，7-9天后细胞几乎融合呈旋涡状排列。培养的脂肪间充质干细胞体外增值较快，增长比较稳定。成软骨诱导后2一3天细胞发生聚集。对高密度细胞团块番红O染色阳性，未发生聚集的细胞则呈弱阳性或阴性。RT-PCR测定显示细胞表达11型胶原mRNA。第二部分不同密度脂肪间充质干细胞复合纤维蛋白胶对成软骨能力的影响目的研究不同种植密度的兔脂肪脂肪间充质干细胞复合纤维蛋白胶体外三维立体培养下，细胞成软骨分化的能力。方法取3代培养兔脂肪间充质干细胞分别以2×109L-1，2×1010L-1，2×1011L-1，种植于含纤维蛋白胶的96孔板中，倒置显微镜及扫描电镜观察。成软骨诱导培养3周后，取样、切片行苏木精-伊红染色、胶原免疫组化，RT-PCR检测。结果诱导三周后各组细胞在纤维蛋白胶上黏附较好，且高密度2×1011L-1，组细胞排列紧密，基质形成较多，扫描电镜下高密度组纤维蛋白内细胞粘附生长较多，各组Ⅱ型胶原阳性，随种植密度的升高有逐渐递增的趋势。RT-PCR检测结果显示，随细胞种植密度升高，Ⅱ型胶原mRNA、蛋白聚糖表达均增强。