【摘 要】
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青钱柳(Cyclocarya paliurus)是我国一种十分珍贵的濒危树种,具有极高的药用保健价值。本实验室在实地考察中首次发现由杜仲拟茎点霉(Diaporthe eucommiae)引起的青钱柳病害,命名为叶黑枯病(Leaf black blight),该病主要为害青钱柳的叶片,严重影响了青钱柳相关产业的发展和物种保护。生物防治以其对环境友好、靶标性强、病菌不产生抗药性和低成本等诸多优势展现了
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青钱柳(Cyclocarya paliurus)是我国一种十分珍贵的濒危树种,具有极高的药用保健价值。本实验室在实地考察中首次发现由杜仲拟茎点霉(Diaporthe eucommiae)引起的青钱柳病害,命名为叶黑枯病(Leaf black blight),该病主要为害青钱柳的叶片,严重影响了青钱柳相关产业的发展和物种保护。生物防治以其对环境友好、靶标性强、病菌不产生抗药性和低成本等诸多优势展现了广阔的应用前景,而生物防治青钱柳叶黑枯病的研究尚存在空白。本文采用连续稀释分离法和涂布平板法对青钱柳根际微生物进行分离和纯化,采用平板对峙法筛选出能显著抑制病原菌的拮抗微生物,并对拮抗菌的抑菌谱进行了分析;基于形态学、生理生化特征和16S rRNA基因序列分析对拮抗菌株进行了鉴定;采用单因素试验设计法优化拮抗菌株的发酵条件,带毒平板法测定最佳发酵条件;还对拮抗菌株拮抗作用的抗生机理进行了初步探究。得到如下结果与结论:1、共分离到32株青钱柳根际微生物,包括8株细菌、18株真菌和6株放线菌;其中细菌菌株QJK-3和放线菌菌株QJK-26展现了很好的抑菌能力,抑菌率分别为72.22%和84.67%。菌株QJK-26还能抑制水稻纹枯病菌、稻瘟病菌和芽孢杆菌属细菌,具有广谱抑菌性。2、拮抗菌株QJK-3为革兰氏阳性细菌,观察细胞呈短杆状,过氧化氢酶阳性,能产芽孢;LB培养基上菌落向周围无规则凹凸生长,边缘不平滑,呈波纹状,表面有褶皱纹路,不透明的淡黄色,综合表型和基因型鉴定为Bacillus sp.QJK-3。拮抗菌株QJK-26为革兰氏阳性菌,菌丝无横隔、有分支,孢子丝呈现柔曲或钩状的对生生长形态,通过与相似性最高的几株模式菌株比对,鉴定其为链霉菌属一潜在新种,命名为潭州链霉菌(Streptomyces tanzhouensis sp.nov.)。3、拮抗菌株QJK-26抗菌活性物质产生的最适发酵培养基为小米培养基,最佳发酵条件为pH 8,转速180 rpm,接种量5%,温度32℃,发酵时间为2 d,装液量为2/5。4、拮抗菌株QJK-3和拮抗菌株QJK-26均存在抗生作用这一作用机制。它们能抑制病原菌菌丝的生长和影响孢子的萌发,并能分泌某些挥发性代谢产物(VOCs)来抑制病原菌的正常生长代谢,还具有很强的产胞外蛋白酶的能力,但不产几丁质酶、葡聚糖酶和纤维素酶。
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