H7亚型禽流感病毒HA蛋白及N1、N9亚型NA蛋白单克隆抗体的制备

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhouhai3032
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禽流感是由正黏病毒科流感病毒属A型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)引起的一种禽类传染病,野生水禽和野鸟是其天然储存宿主。根据表面糖蛋白抗原性差异,可将其分成多个血清型,包括16个HA亚型和9个NA亚型,均可从水禽中分离得到。近年来,以H5N1和H7N9亚型为代表的禽流感的流行给养禽业带来严重损失,同时对人类健康和世界公共卫生安全构成威胁。  本研究以禽流感监测过程中分离到的H7亚型不同分支禽流感全病毒株交替进行小鼠免疫,利用HI实验筛选出5株HA亚型MAbs,分别命名为4H4,4G8,4F7,4B8,3C1,并对所筛选出的MAbs进行一系列生物学特性分析。抗体亚类检测结果表明除4H4为IgG2a,K链外,其余单抗株均为IgG1、K链。HI实验结果表明,4H4这株单抗可以与除A/ENV/FJ/S3148/2013(H7N8)毒株外的所选的不同分支的H7亚型分离株反应,具有较高的广谱性和HI效价。而其余单抗株广谱性相对较差,只能与部分H7亚型分离株反应,说明H7亚型AIV既有相对保守的抗原位点,又存在不同HA活性的抗原位点。中和实验结果表明,5株单抗株均具有较广谱的中和活性。IFA实验结果表明,5株单抗均可以与pCAGGS-H7瞬时表达的HA蛋白特异性结合。本研究为H7亚型AIV的鉴别和诊断奠定了物质基础,为研究AIVHA蛋白抗原结构与功能提供物质手段。  采用NA亚型相同HA亚型不同的禽流感全病毒株与pCAGGS-NA真核表达重组质粒交替进行小鼠免疫,其中全病毒采用腹腔注射的方式,质粒采用肌肉注射的方式,利用IFA实验最终筛选出7株N9亚型、5株N1亚型单抗,并对所筛出的单抗进行初步生物学特性鉴定。对单抗亚型鉴定结果显示7株N9亚型单抗重链均为IgG1亚类,轻链均为K链,5株N1亚型单抗重链均为IgG2b亚类,轻链均为K链。IFA实验结果表明,所筛选出的MAbs与相应病毒分离株具有一定的交叉反应性。本研究为建立一种快速、准确鉴别血清中N1、N9亚型NA抗体的方法奠定基础。
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