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目的:
探讨缓冲过的、未激活的富血小板血浆(Buffered PRP)的培养基是否能够促进脂肪基质干细胞(ADSCs)软骨样分化和增殖。
方法:
分离、培养Wistar大鼠的ADSCs;采用免疫荧光法进行鉴定;从Wistar大鼠动脉血中提取PRP,并制备Buffered PRP;ADSCs分别在加有10％Buffered PRP的DMEM培养基和正常DMEM培养基中培养;诱导一周后细胞爬片行免疫组化鉴定Ⅱ型胶原表达,甲苯胺蓝染色鉴定蛋白聚糖表达;将实验组和对照组于1、3、5、7天行MTT法测定其增殖活性。
结果:
成功分离、培养Wistar大鼠的ADSCs:免疫荧光法鉴定细胞表面标志CD44、CD29表达阳性;在10％Buffered PRP培养基中,甲苯胺蓝可以和细胞内和细胞外基质中的硫酸蛋白多糖的硫酸基特异性结合,在诱导培养7天的细胞甲苯胺蓝染色可见细胞浆内蓝色异染,蛋白多糖表达结果表达阳性,说明细胞有较强的蛋白多糖合成能力;实验组Ⅱ型胶原免疫组化结果显示细胞呈阳性,可见棕黄色颗粒分布于细胞浆内,而对照组则为阴性,并对免疫组化结果应用SPSS13.0软件对其灰度值统计学分析P＜0.05,而正常培养基中的细胞未有明显变化;将实验组和对照组于1、3、5、7天行MTT法测定其增殖活性,MTT检测Buffered PRP诱导组较对照组增殖明显(P＜0.01)。结果显示PRP对脂肪干细胞有明显的促增殖作用。
结论:
本试验研究证明从大鼠脂肪组织中可提取出脂肪干细胞,在单层培养条件下,实验组免疫组化Ⅱ型胶原呈阳性,甲苯胺蓝染色也是阳性,对照组均呈阴性,MTT法测出实验组细胞较对照组细胞增殖明显,该实验证明了未激活、缓冲过的10％PRP能够促进脂肪干细胞的增殖和软骨方向分化。本实验中所得到的结果为软骨修复的组织工程学研究和临床应用提供了新的科学依据。Buffered PRP的培养基能够促进脂肪基质干细胞(ADSCs)软骨样分化和增殖,为软骨修复的组织工程学研究提供新的科学依据。