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目的:支气管肺发育不良(Bronchopulmonary dysplasis,BPD)是早产儿的常见和难治性疾病之一,其主要特征为肺泡发育不良和微血管发育障碍,致使肺功能下降。目前通过大量的研究发现肺上皮细胞是BPD肺损伤的关键靶细胞。前期我们小组研究证实,在高氧诱导的BPD新生大鼠的肺组织及肺泡Ⅱ型上皮细胞(The Alveolar Type II Epithelial Cell,AT-II cell)中组蛋白甲基化转移酶(Enhancer of zeste homolog 2,EZH2)表达增加,促使上皮-间质转分化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)发生,并通过调控EMT的动态平衡从而影响BPD中的肺发育,然而其确切机制仍不清楚。长链非编码RNA H19(Long non-coding RNA H19,Lnc RNA H19)是胚胎发育相关基因,已经在诸多相关领域被证实,包括在肺组织发育中发挥某些调控作用。大量研究已表明,H19能够在细胞的增殖和分化过程中发挥生物学调控作用。本研究拟通过研究BPD新生大鼠肺组织中LncRNA H19的表达及其对EZH2和裸角质膜同源蛋白1(Naked Cutide Drosophila 1,NKD1)的调节作用,为阐明BPD肺上皮细胞发生EMT的病理机制奠定基础。方法:我们采用高氧(吸入氧浓度为80%)诱导SD新生大鼠BPD模型(n=50),对照组(吸入氧浓度为21%)(n=50),两组分别于生后1d、3d、7d、14d、21d采集肺组织,并应用苏木精-伊红染色(HE)观察肺组织的病理学变化。同时使用透射电子显微镜(TEM)观察ACEⅡ的超微结构。通过免疫组织化学法及免疫荧光双染技术观察EZH2、NKD1在AECⅡ中的定位。采用荧光实时定量PCR及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中H19、EZH2和NKD1的mRNA表达水平及蛋白表达水平。应用RNA结合蛋白免疫沉淀技术(RIP)证实H19与EZH2之间是否具有调控关系。结果:通过观察HE染色,模型组较对照组从3d时开始出现肺泡发育障碍;透视电镜观察到模型组AECⅡ中出现了actin微丝以及空泡化的板层小体;免疫组织化学可见EZH2在肺泡上皮细胞的胞核与细胞浆中均有明显定位,1d开始模型组较对照组表达增强(P﹤0.05),14d时达高峰(P﹤0.001);NKD1主要定位在肺泡上皮细胞的细胞浆中,1d开始模型组较对照组表达下降,直至21d(P﹤0.0001);免疫荧光双染可示EZH2和NKD1分别同p180在AT-Ⅱ中存在共表达;荧光实时定量PCR结果显示:模型组H19的mRNA表达水平从7d时开始较对照组增加(P﹤0.05),EZH2 mRNA表达水平从3d时开始高于对照组(P﹤0.05),NKD1 mRNA表达水平从3d时开始低于对照组(P﹤0.05),且基因水平随高氧暴露时间延长两组差异愈发明显(P﹤0.01);同样Western blot结果显示,与对照组比较,模型组EZH2蛋白表达从1d开始增高,趋势持续到21d(P均﹤0.05);而模型组NKD1蛋白表达较对照组从1d开始减少(P﹤0.05),直到21d(P﹤0.01);RIP实验确定H19和EZH2在肺组织中存在直接作用关系;相关性分析提示H19与EZH2基因表达呈正相关关系(P<0.05)、EZH2与NKD1基因表达呈负相关关系(P<0.05)。结论:在BPD的发生、发展中,肺组织H19与EZH2基因与蛋白水平表达均上调,且H19表达高峰先于EZH2,而NKD1基因与蛋白水平表达下调,提示H19可能通过调控EZH2,作用于NKD1使其表达受到抑制,介导AECⅡ发生EMT导致肺发育不良,最终阻滞了肺发育。