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目的: MicroRNA与幽门螺杆菌感染所致的炎症密切相关,而幽门螺杆菌感染是胃癌的重要发病原因。MicroRNA可通过与相关炎性靶基因3’-UTR区结合,调控炎性基因,影响炎性通路的活化及炎性因子的表达,进而调控和参与肿瘤发生发展的多种病理过程。IL-1家族是一类重要的炎性细胞因子,但目前,对 IL-1F5的研究相对较少,尤其是与胃癌相关的研究。通过靶基因预测,发现在 IL-1F5的3’-UTR区可能存在miR-197的靶结合位点,本研究主要对预测出的 miR-197与胃癌相关慢性炎性基因 IL-1F5的靶关系及功能进行初步验证。 方法: 根据靶基因预测结果及本课题组前期对 IL-1F5的3’-UTR区 SNP与胃癌易感性关系的研究,人工构建 miR-197的过表达质粒载体pGenesil-1-miR-197,并与 pGenesil-1、miR-197抑制物和 miRNA抑制物对照共同转染人胃癌细胞系 SGC-7901和 BGC-823,分别提取各组细胞总 RNA和总蛋白。然后,利用 qRT-PCR技术分别检测各组 miR-197和内参 U6,IL-1F5和内参 GAPDH的表达量,Western Blot技术检测 IL-1F5和内参 GAPDH蛋白的表达量;并对各组的相对表达量进行 t检验分析,检验水准α为0.05。所有实验均独立重复三次,结果以均数±标准差表示。所用统计学软件为 SPSS21.0。 结果: (1)miR-197的过表达质粒载体 pGenesil-1-miR-197经单双酶切鉴定发现酶切片段大小一致,测序结果序列对比分析一致,载体构建成功。(2)人胃癌细胞系 SGC-7901和 BGC-823中,重组质粒 pGenesil-1-miR-197组与质粒 pGenesil-1组 miR-197的相对表达量分别为3.55±0.032和0.77±0.072,3.07±0.056和0.94±0.030(P值均<0.001); miR-197抑制物组与抑制物对照组 miR-197的相对表达量分别为0.33±0.025和0.59±0.069(P=0.003),0.62±0.035和0.84±0.015(P=0.001);差异均有统计学意义。重组质粒 pGenesil-1-miR-197组与质粒 pGenesil-1组 IL-1F5的相对表达量分别为0.26±0.051和0.39±0.042(P=0.033),1.01±0.087和1.37±0.10(P=0.01);miR-197抑制物组与抑制物对照组 IL-1F5的相对表达量分别为3.23±0.098和0.72±0.063( P<0.001),2.94±0.17和1.97±0.061(P=0.001);差异均有统计学意义。(3)人胃癌细胞系 SGC-7901和 BGC-823中,重组质粒 pGenesil-1-miR-197组与质粒 pGenesil-1组 IL-1F5蛋白的相对表达量分别为0.09±0.025和0.30±0.103(P<0.001),0.18±0.004和0.48±0.013(P<0.001),差异均有统计学意义;miR-197抑制物组与抑制物对照组 IL-1F5蛋白的相对表达量分别为0.46±0.025和0.38±0.013(P=0.006),0.65±0.021和0.38±0.027(P<0.001),差异均有统计学意义。 结论: 重组质粒 pGenesil-1-miR-197构建及转染成功,且转染后上调了miR-197在人胃癌细胞系 SGC-7901和 BGC-823中的表达。重组质粒pGenesil-1-miR-197转染后下调了 IL-1F5在 SGC-7901和 BGC-823中的表达水平,miR-197抑制物上调了 IL-1F5在 SGC-7901和 BGC-823中的表达水平。IL-1F5可能是 miR-197的靶基因,且 miR-197负性调节 IL-1F5的表达。