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碳酸酐酶(Carbonic Anhydrase, CA)是一类催化CO2和HCO3-之间相互转化的含锌金属酶,与光合作用密切相关。对油菜碳酸酐酶进行基因定位,对找到控制CA酶活基因和筛选具有高CA活性的油菜、提高油菜产量具有重要意义。 本研究以甘蓝型冬油菜品种Tapidor和半冬性油菜品种Ningyou7亲本构建的TNDH群体为研究对象。在2011-2012年对TN群体5个不同时期的叶片CA酶活进行了测定,结合2008-2009年TN群体3个不同时期的CA活数据,对CA酶活进行了QTL定位和互作分析,结果表明,A9连锁群上存在不同时期重复出现的QTL。之后根据拟南芥中CA相关基因设计了82对GBM引物,筛选出28对差异引物,其中的26对引物定位在了以TN932为基础的遗传连锁图中。利用整合的连锁图,再次对CA酶活进行QTL定位,发现其中ACA1-A9b被定位在了QTL置信区间,和TN932的结果相比,不仅缩小了该QTL的区间,并且提高了加性效应和解释遗传变异的效应值。通过和白菜、甘蓝和拟南芥之间比较作图,得到了位于QTL区间内的Bra016223,Bra027010,Bol015857,Bol02257,Bra006942这五个候选基因。最后,对这5个候选基因进行了初步克隆,得到了TN亲本的Bra027010, Bra006942, Bol022577这3个基因的基因组序列,并且构建了TN亲本的Bra016223,Bra006942, Bol015857的原核表达载体。