“喀什哈尔”葡萄再生体系建立

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葡萄是世界上最重要的经济水果之一。在我国葡萄生产是农业生产的一个重要组成部分。近年来,分子生物学和植物基因工程技术的迅速发展,为作物的品种改良开辟了一条新途径。用基因工程手段进行品种改良不仅可以有针对性地变植物性状,而且与常规育种相比,具有投资少、见效快及可以充分利用远缘的基因资源等优点。本研究首次以新疆特有品种“喀什哈尔”葡萄为材料进行了建立叶片、茎段再生体系的研究。取得的结果有:1.以单芽茎段的方式建立了无菌培养体系。探讨了不同取材时间,不同植物激素配比对初代培养的影响,最佳取材时间为春末夏初之际,此时外植体的污染率较低且萌芽率最高,而盛夏、秋季不宜取材,虽然秋末取得的休眠芽培养后污染率最低但其萌芽率很低。获得了最佳初代培养基为MS + 6-BA 1.Omg/L + NAA 0.01mg/L;探讨了不同浓度激素配比对继代培养的影响,其中以MS + KT 0.1 + IBA 0.4mg/L为最佳继代培养基,侧芽萌发和生根同时发生,且萌发侧根数量和长度最为理想,苗形态正常,生长健壮,生根率可达100%。2.以MS、NN69基本培养基分别附加6-BA 2.0 mg/L + IBA 0.2 mg/L培养“喀什哈尔”叶片和不带芽茎段得出MS基本培养基为“喀什哈尔”再生最适基本培养基。附加不同浓度的6-BA、IBA分别处理叶片,得到了“喀什哈尔”葡萄叶片再生的最佳培养基组配为MS + 6-BA 2.0 mg/L + IBA 0.2 mg/L,再生率为14.3%。以MS+KT 0.1mg/L + IBA 0.4mg/L诱导不定芽生根,生根率可达92%。但是“喀什哈尔”葡萄对卡那霉素(Kanamycin)敏感,在附加有卡那霉素3mg/L的筛选培养基中没有获得再生植株。由于葡萄再生困难,探索和采用更为高效快捷的遗传转化途径成为葡萄遗传转化的可行思路。本实验以“京亚”葡萄为材料作了花序浸染法对昆虫抗冻蛋白基因MpAFP149转化的初探。以未浸染花序的种子作了不同消毒条件下的萌发试验,得到了最佳消毒条件:70%乙醇15S ,0.2%升汞3min;建立L934正交试验对“京亚”葡萄种子萌发条件作了优化,探讨了4个因素包括光照、GA3浸种浓度和浸种时间以及培养基质对“京亚”葡萄种子萌发的影响,得到了优化的萌发条件为GA34000mg/L浸种48h,然后置入1/2MS培养基中暗光培养。以未浸染的种子作卡那霉素抗性试验,得到未转化“京亚”种子抗卡那霉素的临界浓度为40mg/L。
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