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β转化生长因子(TGF-β)是一族多功能的多肽蛋白,广泛存在于机体正常组织细胞以及转化细胞中,骨组织和血小板中含量最高。目前已鉴定出5种不同分子类型的TGF-β,即TGF-β1-TGF-β5,其氨基酸有64%~82%同序。哺乳类中存在3种,TGF-β1-TGF-β3。虽然其分子结构不尽相同,却有着相似的生物活性。在整个进化过程中,不同种属间的TGF-β高度同源,人和牛的TGF-β1氨基酸序列完全相同。 现已证实,TGF-β具有促进细胞增殖、调节细胞分化、促进细胞外基质合成和调节机体免疫作用。体外实验表明,TGF-β可促进骨膜间充质细胞的增殖和分化,促进成骨(软骨)细胞的增殖,刺激Ⅰ型胶原、骨连结素(Osteonectin)和骨桥蛋白(Osteopontin)的合成。同时,TGF-β可抑制破骨细胞的生成以及成熟破骨细胞的活性,从而抑制骨吸收作用。由此可见,TGF-β在骨组织代谢过程中起着十分重要的作用。本文对牛血小板TGF-β的提取、纯化,其生物学鉴定以及TGF-β在骨修复中的作用进行了实验研究。 1.TGF-β的提取、纯化及其生物学鉴定 实验以牛血为原料,分离出血小板,采用酸醇抽提方法,提取血小板蛋白。相继进行两次Bio-Gel P60柱层析,分离纯化出TGF-β。SDS-PAGE显示其分子量为25KD。TGF-β,在表皮生长因子的参与下,具有刺激软琼脂培养中的NRK细胞呈克隆生长的特性。以此方法提取的TGF-β,10ng/ml的浓度可刺激NRK细胞呈克隆生长。薄层分析表明,纯品的纯度达93.07%;提取率为3-4mg/Kg湿重血