污叉丝孔菌(Dichomitus squalens)倍半萜代谢产物及杀线虫活性研究

来源 :中国科学院华南植物园 中国科学院华南植物研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xzw333
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生物间的化学关系是生态学研究的热点。利用生物次生代谢产物防治病虫害的研究近年来倍受关注。植物寄生线虫是被防治的目标生物之一。松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)是中国林业上重要的外来入侵性病虫害之一,是当前我国林业上的头号病害,尚无有效的治理办法。本研究基于松材线虫与担子菌之间的化学关系,旨在从担子菌中筛选抗松材线虫的天然产物,为开发新型环保生物农药提供先导化合物。本研究采用浸泡法、棉球法和咸水虾致死试验等多种生物活性筛选方法,对采自2000-2002年鼎湖山自然保护区的85株担子菌进行活化,对其中66株可活化菌进行杀线活性筛选,并选择一株高活性菌.污叉丝孔菌(Dichomitussqualens)做进一步研究。主要结果如下:   浸泡法试验结果表明:稀释10倍的粗提液,处理24h后,线虫校正死亡率>80%的菌株有SC0197;72h校正死亡率(80%,100%)的菌株有SC0351和SC0507,校正死亡率(60%,80%)的有SC0313、SC0528、SC0527,SC0543、SC0649、SC0652、SC0769,校正死亡率(O,60%)的为其余56株可活化菌株。   选择11株菌进行棉球法活性实验,结果表明:SC0351、SC0507、SC0529、SC0649、SC0769,线虫增殖比率<10%,有极强杀线虫活性,记为+++;SC0197和SC0527的线虫增殖比率(10%,25%)有强活性,记为++;SC0313、SC0528、SC0543的线虫增殖比率(25%,40%)有活性,记为+;SC0652的线虫增殖比率>40%,无活性,记为。。   咸水虾致死试验结果显示:SC0197和SC0649的LC90为1000μg/ml。并分别鉴定为污叉丝孔菌(Dichomitus squalens)和灵芝(Ganodermasp.)。   根据以上活性筛选结果,本研究选择污叉丝孔菌菌丝体进行固体大量发酵。采用95%乙醇提取固体发酵物。粗提物依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取分相。对氯仿相提取物用硅胶柱层析、凝胶柱层析、反相柱层析多次分离纯化,得到多个单体化合物。   运用现代光谱(IR、EIMS、HRTOFMS、1DNMR、2DNMR)技术鉴定出3个新型倍半萜化合物的结构,分别命名为叉丝菌醇(Dichomitol,1)、2p,13-二羟基喇叭醇(2p,13-Dihydroxyledol,2)、叉丝菌酮(Dichomitone,3)。其中,叉丝菌醇(1)和叉丝菌酮(3)具有新颖的结构骨架,前者属新型荷苏烷倍半萜重排结构骨架,后者为首例同时具有2,3.裂环和1,10-裂环的香橙烷型倍半萜。   对分离到的3个新型倍半萜进行杀线虫活性测定。浸泡法实验结果表明:化合物1、3无明显杀线虫活性;施药24h后,化合物2的LC50是35.6μl/ml。化合物2是首次发现的具杀线虫活性的香橙烷型倍半萜。
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