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人类乳头瘤病毒(HPV)是经分子流行病学已经清楚证明的引起宫颈癌的主要原因，HPV为一种双链DNA病毒，其基因组高度变异。目前发现的HPV共有一百余种基因型，16、18、31、45四种基因型为致癌的高危型，存在于80％以上的宫颈癌中。研究表明E7病毒基因在增殖期基层细胞中低表达，而在HPV相关肿瘤中则为高表达，这使它成为宫颈癌检测和防治的主要靶抗原。
目标：克隆和表达HPV16，18，31，和45四个亚型的E7蛋白，为将来治疗性疫苗的研发提供实验基础。
方法：首先从HPV16、18、31和45基因组中分别克隆出四个HPV亚型的E7 DNA，PCR扩增目的基因片段后用限制性内切酶Xba Ⅰ和Sac Ⅱ消化纯化的PCR产物，进而将双酶切的目的基因片段插入真核表达载体 pcDNA3.1/V5-His TOPO (pcDNA3.1)的CMV启动子下游，构建pcDNA3.1-Decorin-HPV16 E7，pcDNA3.1-Decorin-HPV18 E7 ，pcDNA3.1-Decorin-HPV31 E7 和pcDNA3.1-Decorin-HPV45 E7四个重组质粒；然后将这些重组质粒转染Cos-7和CHO细胞，蛋白质印迹(Western blotting)实验检测其表达情况；继而用有限稀释法筛选稳定表达HPV16 E7和HPV18 E7的细胞株CHO-HPV16 E7和CHO-HPV18 E7，对两株细胞从DNA、RNA以及蛋白水平鉴定E7的稳定表达。然后放大培养上述细胞株；通过冻融破碎细胞、硫酸铵分级沉淀、镍亲和层析的方法初步提取和纯化重组蛋白rHPV16 E7和rHPV18 E7。
结果：本实验在成功构建pcDNA3.1-Decorin-HPV E7重组表达质粒的基础上，筛选到了能稳定表达HPV16 E7和HPV18 E7的CHO细胞株，进而纯化了E7蛋白，为下一步HPV治疗性疫苗的研制和检测试剂的开发奠定了基础。