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赭曲霉毒素（ Ochratoxin ）是曲霉菌属（ Aspergillus ）、镰刀菌属（Fusarium）和青霉菌属（Penicillium）的某些种产生的二级代谢产物,包括赭曲霉毒素A、B、C、D四种结构类似的化合物,其中赭曲霉毒素A（Ochratoxin A, OTA）在自然界分布最广泛,毒性最强。赭曲霉毒素A是一种对肝脏和肾脏的强毒物质,普遍存在于饲料、谷物及动物体内,可以导致受试动物的免疫抑制、肾萎缩、胎儿畸形、流产及死亡,并具有高度的致癌、致畸、致突变的作用,国际癌症研究机构LARc将其定为2B类致癌物（即可能引起人类癌症的物质）。加强对OTA的全面监测是防止污染OTA的食品和饲料直接或间接地进入人类食物链的重要方法。ELISA法由于具有特异性强,灵敏度高,操作简便,且适于大批量样品快速检测等优点而越来越被人们重视和采用。本研究分析了OTA的分子结构,成功偶联了人工抗原,运用杂交瘤细胞技术制备了单克隆抗体,组装了OTA间接竞争ELISA试剂盒并对其性能进行了评价,确立了常见样品的快速处理方法,为OTA快速检测试剂盒的应用及推广打下了基础。1.人工抗原的制备与鉴定采用活性酯法（NHS法）将赭曲霉毒素A（OTA）与载体牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清蛋白（OVA）相连接,合成了大分子人工抗原OTA-BSA和OTA-OVA。并利用紫外扫描法（UV）、SDS-PAGE凝胶电泳试验及动物免疫试验等手段对人工抗原进行了初步鉴定,结果显示:人工抗原的紫外吸收峰包含OTA及蛋白载体的紫外扫描特征峰,且在此基础上出现了偏移;其分子量较载体蛋白也有所增加;具有良好的免疫原性,从而充分说明了OTA人工抗原制备成功。2.单克隆抗体的制备与鉴定选择产多克隆抗体质量较高的小鼠为融合备用鼠,利用单克隆抗体技术,结合ELISA筛选体系,经融合、筛选后,获得可以稳定产生抗OTA单克隆抗体的杂交瘤细胞株3株,分别命名为1F12、2A11、1G12,用体内诱生腹水法制备腹水,经纯化后鉴定,三株抗体的效价均在10-6以上,IC50均在1ng以下,其中2A11mAb敏感性最好（IC50=0.163ng/mL）,亲和常数分别为9.74×1011L/mol、3.28×1010 L/mol和9.91×1010 L/mol,抗体除了与OTB（16.3%）有交叉反应外,与载体蛋白和其他常见真菌产物交叉反应均小于0.03%。3.OTA间接竞争ELISA快速检测试剂盒的组装利用间接竞争ELISA检测原理,组装了OTA间接竞争ELISA试剂盒。试剂盒的标准曲线线性良好,相关系数R2为0.9921,线性回归方程为y=-0.4804x+1.4859,根据回归方程计算出IC50为0.113 ng/mL,批内批间变异系数均小于15%,且可在4℃下保存180天未出现质量问题。试验还确定了饲料、谷物、牛奶及动物血清的样品快速处理方法,并分析了基质效应的影响,从而证明了本试验制备的OTA快速检测试剂盒可以推广应用于OTA残留的快速定量检测。