论文部分内容阅读
目的：研究X线修复交叉互补基因1(X-ray repair cross-complementing group1，XRCC1)对肾癌细胞增殖、迁移以及侵袭的影响，并探讨其相关的分子作用机制。 方法：应用siRNA技术干扰肾癌细胞中XRCC1蛋白的表达，并通过WesternBlot技术检测其干扰效果;CCK-8细胞增殖实验分析XRCC1基因沉默后786O和ACHN两种肾癌细胞株增殖的变化;Transwell小室细胞迁移实验和划痕实验研究XRCC1基因干扰后对786O和ACHN两种肾癌细胞株迁移潜能的影响;Transwell小室侵袭实验研究XRCC1基因干扰后对786O和ACHN两种肾癌细胞株侵袭潜能的影响;Western Blot实验检测XRCC1基因干扰后两种肾癌细胞株TIMPs和MMPs蛋白表达水平的变化;明胶酶谱实验研究XRCC1基因干扰后786O和ACHN细胞分泌MMPs的变化;应用MMPs抑制剂阻断MMPs通路，通过Western Blot技术及明胶酶谱实验检测通路阻断后对两种肾癌细胞分泌MMPs水平的影响;Transwell细胞迁移、侵袭实验观察通路阻断后对两种肾癌细胞迁移及侵袭的影响。 结果：1.XRCC1 siRNA可以显著下调786O和ACHN两种肾癌细胞中XRCC1蛋白的表达水平;2.CCK-8细胞增殖实验显示:XRCC1基因干扰后对786O和ACHN两种肾癌细胞的增殖能力没有影响;3.划痕实验显示:与转染Control-siRNA组相比，转染XRCC1-siRNA组细胞划痕愈合速度较快，差别有统计学意义;Transwell细胞迁移实验结果显示:XRCC1基因干扰后786O和ACHN两种肾癌细胞的迁移能力增强，与对照组相比分别增加了50％和43％，差别有统计学意义(P＜0.01);4.Transwell细胞侵袭实验显示:XRCC1基因干扰后786O和ACHN两种肾癌细胞的侵袭能力显著增强，与对照组相比分别增加了67％和76％，差别有统计学意义(P＜0.01);5.Western Blot实验显示:XRCC1基因干扰后786O和ACHN两种肾癌细胞中TIMP-1、TIMP-2蛋白表达水平明显下调，而MMP-9、MMP-2的蛋白表达水平显著上调。6.明胶酶谱实验显示:与Control-siRNA组相比，XRCC1-siRNA组两种肾癌细胞中MMP-2、MMP-9的酶活性均明显增强，差异有统计学意义;7.在XRCC1-siRNA组的基础上应用MMP-2/MMP-9抑制剂阻断MMP-2/MMP-9通路后，Western Blot实验及明胶酶谱实验显示:MMP-2和MMP-9的表达及活性恢复至Control-siRNA组水平;Transwell细胞迁移及侵袭实验显示:通路阻断后两种肾癌细胞的迁移、侵袭能力显著下降，接近Control-siRNA组水平。 结论： XRCC1基因干扰后通过下调TIMP-1和TIMP-2蛋白的表达水平，进而上调基质金属蛋白酶MMP-9和MMP-2的表达，从而增加了肾癌细胞的迁移、侵袭潜能。