【摘 要】
：
由于抗生素在畜牧业及食品生产中持续性以及预防性或过度使用,使得细菌为了克服抗生素的治疗效果而不断的发生突变进而造成细菌耐药性的产生以致于形成多重耐药菌。而由细菌严重耐药造成的各类疾病的感染率正在继续上升,因此细菌耐药已逐渐对全球的生物群体健康产生了严重的威胁。近年来,随着无抗养殖的号召在行业里得到越来越多人的认可,作为抗生素的有效替代选择---噬菌体的应用逐步受到重视。与此同时,目前人工改造噬菌体
论文部分内容阅读
由于抗生素在畜牧业及食品生产中持续性以及预防性或过度使用,使得细菌为了克服抗生素的治疗效果而不断的发生突变进而造成细菌耐药性的产生以致于形成多重耐药菌。而由细菌严重耐药造成的各类疾病的感染率正在继续上升,因此细菌耐药已逐渐对全球的生物群体健康产生了严重的威胁。近年来,随着无抗养殖的号召在行业里得到越来越多人的认可,作为抗生素的有效替代选择---噬菌体的应用逐步受到重视。与此同时,目前人工改造噬菌体的理论和技术正在不断的进行优化并已取得了一定的进展,使基因工程改造噬菌体在临床应用方面具有更高的安全保障及应用潜力。本研究通过丝裂霉素C诱导及双层平板噬斑法以一株野生型多重耐药大肠杆菌作为宿主菌,成功分离纯化到一株λ温和性噬菌体并将其命名为PEA3b,结合BAC+Red ET反向遗传操作系统构建了以噬菌体两端作为同源臂的p BAC11-15A-ccd B-HA质粒,将该质粒与携带NDM-1耐药基因识别靶点的CRISPR/cas9质粒及λ噬菌体全基因在Gbdir中线线重组,经特异性引物PCR及凝胶电泳验证后,完成工程λ噬菌体基因组的连接。将获得的工程噬菌体经从C100工程菌大量增殖后作用于野生型耐药宿主菌,结合荧光定量及野生型耐药宿主菌耐药表型的变化来评估工程温和性噬菌体对耐药细菌的耐药基因进行定向的剪切与消除效果。结果显示:（1）λ温和性噬菌体PEA3b经两次纯化后可在双层平板上形成透亮,均一的圆形噬菌斑;用磷钨酸负染法经投射电镜观察该噬菌体具有50nm左右大小的头部及末端有细小尾丝的非收缩尾;其最佳感染复数为10-1;其宿主谱较窄,仅能侵染并裂解同批次临床分离的3株携带NDM-1多重耐药大肠杆菌（3/20）。（2）经高通量测序结果显示,该噬菌体的全基因组全长为52489 bp,GC平均含量为49.40%。在全基因序列中进行NDM-1基因的查找,结果显示该噬菌体的基因内未携带NMD-1耐药基因。（3）使用最佳MOI值的工程噬菌体与野生耐药细菌进行作用,结合荧光定量及野生型耐药宿主菌耐药表型验证结果显示,工程λ噬菌体可一定程度上降低野生耐药菌群中NDM-1耐药基因的含量,恢复部分碳青霉烯类抗生素对细菌的敏感性。综上所述,该工程λ噬菌体可从一定程度上消除细菌耐药性的产生与传播的基础。并为以后消除其他耐药基因的工程噬菌体构造打下理论基础与技术支撑。
其他文献
荔枝（Litchi chinensis Sonn.）为无患子科（Sapindaceae）荔枝属（Litchi）植物,是我国最具国际竞争力和出口前景的特色果品之一。目前荔枝选育种工作已经开展较多,但主要集中在实生选种方面,难以育成熟期错开、大果优质和丰产稳产集于一身的品种。人工杂交则可望克服实生选种的局限性,培育优点更多、缺点更少的优良新品种,进而用于改善荔枝的品种结构和产品结构,提升产业的经济效益
鸡新勋恙螨是放养肉鸡常见的体外寄生虫,在我国各地均有分布,尤以长江以南的亚热带地区发病较为严重。鸡新勋恙螨的幼虫寄居在鸡体皮肤内,以组织液和血液为食,造成鸡体组织反应较大,在鸡体皮肤形成痘疹样病灶。由于目前我国黄羽肉鸡朝着屠宰后光鸡销售的模式转型,光鸡带有新勋恙螨病灶会影响胴体卖相,进而严重影响养户及公司的经济利益,因此本病的防控越来越受到人们的高度重视。本研究对采自广东云浮和福建莆田的鸡新勋恙螨
冠果蝇亚科（Steganinae）是果蝇科（Drosophilidae）的两个亚科之一;白果蝇属（Leucophenga）是冠果蝇亚科的最大类群。当前,冠果蝇亚科及白果蝇属的分子系统发育研究较少。迄今为止,Gen Bank上可利用的完整或不完整的果蝇科线粒体基因组只有果蝇属（Drosophila）的23种。本研究尝试以线粒体基因组为切入点,通过低覆盖度的全基因组测序获得冠果蝇亚科13属77种,包括
蕨类植物作为维管植物的第二大类群,在生物进化和生态系统中发挥着重要作用。叶绿体基因组具有基因组小、拷贝数高、进化保守的特点,叶绿体基因组全序列能从单个基因到基因组水平为系统发育和分子进化研究提供重要的信息。RPS12（Ribosomal Protein Small Subunit 12）在核糖体30S小亚基形成的起始过程中发挥着重要作用,该蛋白在植物中由叶绿体rps12基因编码。对于不同植物,其r
辣椒（Capsicum spp.）是一种重要的蔬菜和调味品。辣椒在世界各国都有栽培,其中中国是栽培面积最大的国家。但由于辣椒并非我国原产,国内辣椒遗传基础较为狭窄,尤其缺乏优质抗病抗逆的材料,利用目前现有的栽培品种较难在育种上取得突破性的进展,所以迫切需要引入野生辣椒资源。染色体单片段代换系是研究重要农艺性状分子遗传基础的重要材料。目前已构建染色体片段代换系的大多集中在大田作物中,例如水稻、玉米、
肉鸡肺动脉高压综合征（pulmonary hypertension syndrome,PHS）是一种常发生于快速生长肉鸡的营养代谢性疾病。由于其发病原因复杂,难以单纯通过饲养管理防控。该病病初无明显症状,被发现时通常已接近出栏日龄,由此造成严重损失。通过控制肉鸡的生长速度可以预防PHS,但有悖于高效生产的原则。所以寻找一种安全、有效的防治药物成为迫切需要。我国传统医学已发展多年,具有独特的知识体系
螟黄赤眼蜂Trichogramma chilonis是防治害虫的优良蜂种,短管赤眼蜂Trichogramma pretiosum是完全感染Wolbachia并行孤雌产雌的品系。本实验采用高温胁迫的办法对螟黄赤眼蜂和短管赤眼蜂进行处理,研究了高温持续胁迫（全世代胁迫）和短期胁迫（幼虫期胁迫24h后恢复至正常温度）下,两种赤眼蜂生长发育及繁殖的变化;同时,对高温持续胁迫多代后短管赤眼蜂体内Wolbac
MSTN是控制肌肉生长的负调控因子,也是近些年重点研究的影响畜禽瘦肉率、改善肌肉品质的重要调控基因。Mef2C基因属于Mef2家族,参与骨骼肌肌纤维形成,且促进慢肌纤维的形成。为获得肉质鲜美且能稳定遗传表达的转基因鸡,本实验采用CRISPR/Cas 9基因编辑技术,构建MSTN基因Cas 9敲除载体、MEF2C基因的g RNA-Cas9插入真核表达载体和Mef2C基因打靶载体,从细胞水平到动物个体
本文采用高效液相色谱-质谱串联法（HPLC-MS/MS）通过建立24%盐霉素预混剂在肉鸡组织样品（肝脏、肾脏、皮脂、肌肉）的残留检测方法,对其在肉鸡体内的残留消除进行研究,并对该预混剂在SD大鼠的慢性毒性进行评价。选取240只健康的SPF级SD大鼠,雌雄各半,体重50～70 g,随机分为空白对照组（0 mg/kg·bw）、低剂量组（3 mg/kg·bw）、中剂量组（9 mg/kg·bw）、高剂量组
生物炭肥具有减缓肥料养分释放速率,改善土壤环境和减轻农田病虫害等诸多优点,同时,将生物炭与传统化肥复合制备生物炭肥既能解决生物质资源浪费严重的问题,又能减少传统化肥使用量,实现农业生产过程的节能环保。本文以稻壳生物炭、尿素为原料,通过不同成型方式制备了三种具备缓释效果的新型稻壳炭基尿素肥。通过研究成肥工艺/技术参数对稻壳炭基尿素肥成型、养分释放性能和内部结构的影响,探讨稻壳炭与尿素之间的成型机制和