【摘 要】
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目的: 利用杂交瘤技术制备脐血树突状细胞（DC）和食管癌细胞EC109融合疫苗EC109-DC,分析其生物学特征及体外诱导特异性抗肿瘤免疫应答的能力。方法:1)利用Ficoll-Hypaque密度梯
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目的: 利用杂交瘤技术制备脐血树突状细胞（DC）和食管癌细胞EC109融合疫苗EC109-DC,分析其生物学特征及体外诱导特异性抗肿瘤免疫应答的能力。方法:1)利用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离脐静脉血单个核细胞,免疫磁珠法分离脐血 CD34+干细胞。2)脐血CD34+干细胞体外经细胞因子GM-CSF（300ng/ml）、TNF-α（1.50u/ml）和 SCF（200ng/ml）诱导分化培养,37℃、5%CO2饱湿条件下培养2周,隔日半保留换液补 加相应细胞因子,2周后收集细胞为成熟DC。3)聚乙二醇法（polyethyleneglycol,PEG）将DC与食管癌细胞EC109按5:l比例融合, HLA-DR MicroBeads标记,Mini MACS免疫磁式细胞分选器筛选阳性融合细胞 EC109-DC。4)应用流式细胞分析技术、免疫组织化学方法鉴定DC及融合疫苗表型,应用细胞培养 技术及光镜技术观察EC109-DC的生长特征及形态学变化。5)四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定EC109-DC融合瘤苗诱导淋巴细胞增殖能力及体外特 异性抗肿瘤免疫应答能力。结果:1)免疫磁珠法分离脐血CD34+干细胞收获率为0.8%-1.10%,台盼蓝排斥试验98%以 上呈阴性。倒置显微镜下,CD34+细胞于培养液中悬浮生长,呈小圆形,细胞活力好。2)脐血CD34+干细胞在细胞因子GM-CSF、TNF-α和SCF诱导作用下开始增殖,第3
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