柑桔类柠檬苦素的提取、纯化和体外抗肿瘤的研究

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本文主要研究了柑桔中类柠檬苦素的分布、提取纯化的工艺条件和体外抗肿瘤试验,研究表明: 1、柑桔果实中不同部位类柠檬苦素含量不同,以种子中含量最高,果皮次之,而果汁中含量最低,不同品种间类柠檬苦素含量依次为:邓肯葡萄柚>琯溪蜜柚>南充实生甜橙>锦橙>大红袍红桔。 2、提取的类柠檬苦素经TLC、红外光谱和核磁共振鉴定,确定组分Ⅰ为柠碱,组分Ⅱ为诺米林。 3、柑桔籽类柠檬苦素提取纯化的工艺流程为: 柑桔籽烘干→粉碎→石油醚脱脂→丙酮提取→提取液减压蒸干→石油醚脱脂→过滤 ┌→①二氯甲烷/异丙醇分步结晶→晶体TLC分离→滤渣用二氯甲烷溶解、异丙醇结晶→│ └→②母液→异丙醇加热、过滤→冷却结晶→甲→①柠碱纯品②醇分步结晶→晶体TLC分离→诺米林纯品 4、采用正交试验得出石油醚脱脂的最佳组合为:25℃,pH7.0,浸提10h;通过三元二次回归通用旋转组合设计得出丙酮浸提类柠檬苦素的最佳工艺条件为:(1)柠碱的最优浸提条件为:浸提温度35℃,浸提时间25h,丙酮用量47ml/g;(2)诺米林的最优浸提条件为:浸提温度30℃,浸提时间30h,丙酮用量47ml/g。二者综合的最优浸提条件为:浸提温度30℃,浸提时间30h,丙酮用量47ml/g,经试验验证可使类柠檬苦素得率达370.75-372.66(mg/kg)。 5、类柠檬苦素体外抗肿瘤试验表明,柠碱和诺米林对人肝癌细胞株和膀胱癌细胞株均有较好的抑制作用,诺米林的抑制作用大于柠碱,它们的抑制作用随着剂量和作用时间的延长而增加。柠碱和诺米林对人肝癌细胞株的抑制作用均优于对膀胱癌细胞株的抑制作用,而对正常对照细胞小鼠成纤维母细胞株无明显的抑制作用。
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