【摘 要】
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目的紫杉叶素(Taxifolin,TAX)是朝鲜大蓟、落叶松以及花旗松中含量较高的二氢黄酮醇类化合物,据研究表明其具有很好的药理作用潜力。本实验通过建立体内高脂饲料喂养联合急性酒精灌胃和体外细胞刺激脂质蓄积的高脂模型,探讨紫杉叶素对肝脏脂肪蓄积与炎症的干预机制。方法1.急性酒精刺激的非酒精性脂肪肝小鼠的体内实验:正常组、单独给药组均给予喂养普通固体饲料;高脂组给予高脂饲料喂养;单独给药组按25mg
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目的紫杉叶素(Taxifolin,TAX)是朝鲜大蓟、落叶松以及花旗松中含量较高的二氢黄酮醇类化合物,据研究表明其具有很好的药理作用潜力。本实验通过建立体内高脂饲料喂养联合急性酒精灌胃和体外细胞刺激脂质蓄积的高脂模型,探讨紫杉叶素对肝脏脂肪蓄积与炎症的干预机制。方法1.急性酒精刺激的非酒精性脂肪肝小鼠的体内实验:正常组、单独给药组均给予喂养普通固体饲料;高脂组给予高脂饲料喂养;单独给药组按25mg/kg体重给予紫杉叶素;酒精组给予31.25%酒精;给药低中高剂量组按1mg/kg,5mg/kg,25mg/kg体重分别给予紫杉叶素后给予31.25%酒精;对照组按300mg/kg体重给予二甲双胍后给予31.25%酒精;前8周分别按照组别给予普通饲料,高脂饲料进行饲养,自由饮水,每天称量小鼠体重,小鼠进食量。至第9周起,除分组饲养外每天依据组别,各组灌胃给相应浓度药(TAX、metformin)并每天记录小鼠体重,小鼠进食量。小鼠处死的前一天晚间可自由饮水、但禁食。处死当日早7:00末次灌胃给药并给予酒精灌胃。分别用相应的试剂盒检检测谷丙氨酸转移酶(ALT)、谷草氨酸转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)及低密度脂蛋白(LDL-C)的含量。采用HE染色实验和免疫组织化学染色实验观察给与TAX后对小鼠肝脏组织形态学的变化的影响。2.非酒精性脂肪肝的体外实验:选取HepG2细胞刺激造模:给予HepG2细胞不同浓度的TAX(25、50、100、200μM)后间隔1h后分别给予油酸(OA,2mM)刺激18h,棕榈酸(PA,500μM)刺激12h诱导高脂模型,造成肝细胞的一系列变化。造模成功后,提取蛋白做蛋白印迹试验检测Srebp-1、P2x7R的表达,通过免疫荧光染色从而观察Srebp-1、Caspase-1的表达情况及通过油红染色观察肝细胞的形态学变化。结果1.高脂饲料联合酒喂养的小鼠肝损伤模型中,紫杉叶素对于血清中的ALT、AST、TC、HDL-C、LDL-C、TG及肝脏中的TG的水平具有显著抑制效果,具有统计学意义且比阳性对照组的效果明显,HE、油红、免疫组化等肝组织病理学染色表明说明紫杉叶素对酒精刺激的非酒精性脂肪肝具有一定程度的缓解作用。2.体外实验结果证明TAX明显抑制OA及PA诱导的肝细胞中的Srebp-1、P2x7R、Caspase-1 的表达。结论本实验证明高脂饲料可形成脂肪蓄积,而高脂饲料联合酒精急性灌胃引起的脂肪积蓄更为明显。结果表明紫杉叶素能够改善并逆转高脂饲料喂养所引起的脂肪蓄积,并且可对脂肪肝所伴有的炎症有相应的抑制作用,对肝脏有一定的保护作用。
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