清开灵注射液具有清热解毒、镇静安神等作用,对细菌和病毒感染所引起的高热具有显著疗效。为研究清开灵注射液解热作用的活性成分及阐述其解热作用机制,本研究建立酵母诱导的大鼠发热模型,应用代谢组学研究策略,对给药前发热靶器官—下丘脑进行整体代谢轮廓分析,寻找与发热有关的潜在生物标记物并阐述发热过程下丘脑生物化学物质基础。大鼠尾静脉给予清开灵注射液,采用脑部微透析取样技术收集下丘脑透析液,进行含量测定及求算药代动力学参数,初步确定清开灵注射液具有解热作用的活性成分,通过对发热生物标记物与药动学参数进行相关分析,进一步进行验证,从而筛选清开灵注射液中具有解热作用的活性成分,并揭示其解热作用机制。主要研究内容及结果如下：1.发热靶器官代谢轮廓分析众多研究表明,体温调节中枢主要位于下丘脑,为揭示发热过程下丘脑体温调节机制,本研究采用代谢组学研究策略,对酵母诱导的发热模型大鼠下丘脑生物化学物质进行整体代谢轮廓分析,以高分辨的LTQ/Orbitrap作为检测手段,正、负两种离子模式采集数据。利用PCA对正常对照组和发热模型组进行聚类分析,通过OPLS-DA筛选潜在生物标记物,并进行结构鉴定。在下丘脑中发现了17个与发热相关的潜在生物标记物,包括氨基酸类、核苷酸类、维生素类、糖类、磷脂类等成分。研究结果表明,天冬氨酸含量的上升激活了能量代谢、嘌呤代谢、氨基酸代谢和磷脂代谢。这些化合物代谢通路的扰动揭示了发热过程下丘脑体温调节的生化基础。2.基于脑部微透析技术的清开灵注射液主要活性成分药代动力学研究为检测大鼠下丘脑透析液中清开灵注射液主要活性成分的含量,并比较入脑成分在正常对照组与发热模型组大鼠的药代动力学行为,本研究利用酵母诱导大鼠发热,采用脑部微透析技术进行在体动态取样,建立大鼠下丘脑透析液清开灵注射液主要活性成分的UPLC-MS/MS测定方法。利用Phoenix WinNonlin Ver.6.3软件求算药代动力学参数(PK参数),并通过SPSS16.0软件进行统计学分析。结果表明下丘脑透析液中能检测到黄芩苷和栀子苷两种成分,且这两种成分在发热大鼠体内的最大血药浓度值(Cmax)与药时曲线下面积(AUC)均明显高于正常组。因此,黄芩苷和栀子苷是清开灵注射液发挥解热作用的潜在指标性成分。3.潜在发热生物标记物与Cmax、AUC相关分析通过对下丘脑中清开灵注射液主要活性成分的药代动力学研究,初步确定黄芩苷、栀子苷为解热作用的活性成分。为进一步验证该结论,本章建立了潜在发热生物标记物与药代动力学参数之间的相关性回归方程,根据所建方程的稳定性及准确性进行验证。利用SPSS16.0软件对潜在生物标记物峰面积值与黄芩苷、栀子苷Cmax、max值进行多元回归分析,求得回归方程。相关性分析结果表明黄芩苷与发热标记物之间具有较好的相关性。因此,可以确定黄芩苷是清开灵注射液发挥解热作用的主要活性成分。