深绿木霉T2对微生物种群数量的影响及抗药菌株的筛选

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1.通过在土壤中施用深绿木霉T2菌剂,于苜蓿生长过程中各生育期取土样测定其对根围微生物种群数量的影响。研究结果表明,深绿木霉T2菌株对苜蓿根围土壤细菌和真菌有明显的抑制作用,并主要引起种群数量的减少;而对固氮菌有明显的促生作用,对放线菌的影响不大。在苜蓿收获期,对照土壤中的细菌数量最多,达到4.24×1010个/g干土,比土壤处理前提高3.56倍,是深绿木霉T2菌剂处理组土壤细菌群落数量的3.79倍;收获期处理土壤中的真菌数量减少的最多,比处理前减少了4.53倍,比对照减少了8.20倍;处理土壤中放线菌的数量与对照均呈波浪式缓慢上升,两者在数量上并无显著差异;处理土壤中固氮菌数量呈大幅度上升,对照土壤中固氮菌数量呈缓慢上升,收获期处理土壤中的固氮菌数量是对照的3.01倍。2.采用喷雾法在苜蓿叶面喷施深绿木霉T2菌剂,测定其对叶围微生物种群数量的影响。研究结果表明,叶围微生物总体比较丰富,数量差异较大,各类菌群数量排序为细菌>真菌>放线菌。苜蓿叶面喷施深绿木霉T2菌剂后明显引起微生物数量的变化,叶围细菌的数量先缓慢增加后下降,35d后,对照叶围细菌数量达到33.54个/cm2,而处理叶围细菌的数量仅为6.13个/cm2;真菌数量呈先下降后上升的趋势,对照叶围的真菌数量从8.08个/cm2上升到20.57个/cm2,而喷施深绿木霉T2菌剂的叶围真菌的数量从8.08个/cm2下降到0.59个/cm2;放线菌数量没有明显变化。3.本试验采用生长速率法测定了6种常见杀菌剂和5种常见杀虫剂对深绿木霉T2菌株的室内毒力。结果表明,6种杀菌剂和5种杀虫剂对深绿木霉T2菌的生长均有一定的抑制作用,且随着药剂浓度的增加,抑制作用越明显;不同的药剂对深绿木霉菌丝的毒力不同,其中代森锰锌和高效氯氟氰菊酯的毒力最低,EC50值分别为221.14μg/mL和3.59μl/mL;速克灵和毒死蜱的毒力最高,EC50值分别为26.24μg/mL和0.74μl/mL。根据毒力回归方程和EC50结果得出,6种杀菌剂的毒力大小依次为:速克灵>扑海因>多菌灵>百菌清>三唑酮>代森锰锌,5种杀虫剂的毒力大小依次为:毒死蜱>辛硫磷>阿维菌素>氯胺磷>高效氯氟氰菊酯。4.为获得对速克灵有抗药性的菌株,首先对深绿木霉T2菌株进行了紫外光照射并挑选出突变菌株,然后在不同浓度的速可灵(50μg/mL-800μg/mL)培养基上驯化,最后得到了4株对速克灵抗药性较强的菌株:T2-1,T2-2,T2-5和T2-6。10次转化、菌落生长速度测定、产孢数量的测定和对灰葡萄孢菌(Botrytiscinerea)的拮抗作用测定结果表明,此4个菌株生物学特性稳定,其中T2-6菌株显著优于其它3株。经过菌和药的协同作用测定发现,抗药性木霉T2-6菌剂(浓度为108个/g)与速克灵药剂(浓度为800μg/mL)配比为8∶2时,对灰葡萄孢菌的协同抑菌率达86.83%,明显高于单独使用木霉菌和速克灵的抑菌率。
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