缺失型Splt-P49抗细胞凋亡活性的研究

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Ac-P35是第一个被发现的杆状病毒抗细胞凋亡蛋白,能抑制许多生物,如线虫、昆虫和哺乳动物的细胞凋亡。Caspase是一类半胱氨酸类蛋白酶,是细胞凋亡的主要执行者。P35是caspase底物,能与caspase形成稳定的caspase-P35复合物,抑制caspase蛋白酶活性。在一些杆状病毒中发现的P49蛋白是一个分子量较大的P35同源物,其三维结构和作用模式与P35相似。通过序列比对发现相对于P35,在Splt-P49中间插入了一段长130个氨基酸左右的片段。在本研究中,通过引物重叠PCR技术,针对该序列,先后构建了编码Splt-p49但缺失了136个氨基酸的Splt-△P49-303的DNA序列和缺失了77个氨基酸的Splt-△P49-362的DNA序列。利用Bac-to-Bac技术,分别将这两段序列转座入已构建的缺失了Ac-p35的病毒vAcP35-KO的多角体蛋白基因座位中,得到重组病毒vAcP35-KO-△P49-303-PH-GFP和vAcP35-KO-△P49-362-PH-GFP,以研究Splt-△P49-303和Splt-△P49-362在AcMNPV的受纳细胞Sf9中的抗细胞凋亡活性。光学显微镜观察和凋亡染色实验结果显示,重组后的Splt-△P49-303和Splt-△P49-362不能代替P35的抗细胞凋亡能力,同时也失去了P49的抗细胞凋亡的能力,表明P49相对于P35多出的一段氨基酸序列对于P49的抗细胞凋亡功能可能是必须的;为研究p35和p49的起源与进化关系,对p35同源基因进行了初步的生物信息学分析。
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