论文部分内容阅读
目的:
1、探讨嗜热吸水链霉菌是否为大棚作业农民肺的致病菌并探讨诱导大棚肺动物模型的嗜热吸水链霉菌抗原的最适宜剂量。
2、比较雾化吸入和鼻内滴注嗜热吸水链霉菌抗原制剂诱导豚鼠大棚肺模型的差异。
3、比较嗜热吸水链霉菌抗原制剂诱导豚鼠和C57BL/6小鼠大棚肺模型的差异。
方法:
1、不同剂量嗜热吸水链霉菌抗原制剂诱导豚鼠大棚肺模型：成年雌性豚鼠40只，体重：300～400g，随机分为A、B、C、D组，每组10只。A组为对照组，予0.9％无菌生理盐水0.3ml鼻内滴注，每周连续滴注3天，连续滴注12周。B、C、D为模型组，分别予嗜热吸水链霉菌抗原制剂0.2ml、0.3ml、0.4ml三种剂量鼻内滴注，每周连续滴注3天，连续滴注12周。分别于滴注后的1、2、3、4、12周末将豚鼠麻醉固定后行64层螺旋CT拍摄。CT检查后每组随机选择2只豚鼠处死，取右肺石蜡包埋，HE染色，左肺组织匀浆后置于Emerson液体培养基中培养。
2、雾化吸入和鼻内滴注嗜热吸水链霉菌抗原制剂诱导大棚肺动物模型的比较：成年雌性豚鼠40只，体重：300～400g，随机分为模型组（雾化组A1、鼻滴组B1）和对照组（雾化组A2、鼻滴组B2），每组20只。A1组：予5m1嗜热吸水链霉菌抗原制剂日1次雾化吸入，15min/次，连续12周；B1组：予0.3ml抗原制剂鼻内滴注，连续3次/周，持续12周；A2组：予0.9％无菌生理盐水Sml日1次雾化，15min/次，连续12周；B2组：予0.9％无菌生理盐水0.3ml鼻滴，连续3次/周，持续12周。分别于实验后第1、2、3、12周末将豚鼠麻醉固定后行64层螺旋CT拍摄。CT检查后每组随机选择2只豚鼠处死，取肺组织病理切片及组织匀浆进行细菌培养。
3、嗜热吸水链霉菌抗原制剂诱导豚鼠和C57BL/6小鼠大棚肺模型的比较：成年雌性豚鼠10只，体重：300～400g;8周龄雌性C57BL/6小鼠10只，体重：25～30g。豚鼠组(T组)：予0.3ml抗原制剂鼻内滴注，连续3次/周，持续12周；C57BL/6小鼠组（C组）：予0.03ml抗原制剂鼻内滴注，连续3次/周，持续12周。分别于抗原滴注后第1、2、3、12周末每组随机选择2只实验动物异氟烷过量麻醉处死，取肺组织病理切片及组织匀浆进行细菌培养。
结果:
1、不同剂量嗜热吸水链霉菌抗原制剂诱导豚鼠大棚肺模型病理改变：B组于第2周末，C、D两组分别于第1周末出现明显肺泡炎改变，可见炎症细胞浸润，以淋巴细胞为主，并可见单核细胞渗出；B组于第4周末，C组于第3周末，D组于第2周末可见由巨噬细胞、类上皮细胞和朗罕氏巨细胞组成的肉芽肿形成；C组在12周末滴注结束时可观察到肺成纤维细胞数目增多，B组无明显纤维化改变，D组豚鼠多在第3周因肺部感染死亡。2．B、C、D组CT影像上均可见弥漫性磨玻璃影，后可见双肺多发性、边缘模糊的斑片状及微小结节状影，多呈小叶中心型。肺组织研磨后置于Emerson液体培养基中培养后在B、C、D组均可见嗜热吸水链霉菌生长。
2、雾化吸入和鼻内滴注嗜热吸水链霉菌抗原制剂诱导豚鼠大棚肺模型影像学改变：A1组：第1周末，豚鼠肺CT未见异常；第2周末，可见双肺弥漫性磨玻璃影；第3周末，可见双肺可出现散在边界不清的微小结节影；第12周末，可见明显的纤维条索影。B1组：第1周末，豚鼠肺CT可见双肺磨玻璃样改变；第2周末，可见双肺多发性边缘模糊、密度不均的斑片状影；第3周末，可见双肺散在分布的小结节影；第12周末，可见明显的沿支气管分布的纤维条索影。对照(A2、B2)组无异常。病理改变：A1组：第1周末，豚鼠肺组织病理切片未见异常；第2周末，可见肺泡壁和肺泡间质以淋巴细胞为主的炎症细胞浸润；第3周末，可见巨噬细胞、类上皮细胞和朗罕氏巨细胞组成的肉芽肿；第12周末，可见成纤维细胞增生。B1组：第1周末，可见明显的淋巴细胞为主的炎症细胞浸润；第2周末，可见肺泡壁增宽，单核细胞渗出；第3周末，可见肉芽肿形成；第12周末，可见成纤维细胞增生、胶原沉积。对照(A2、B2)组无异常。肺组织研磨后置于Emerson液体培养基中培养后在A1、B1组均可见嗜热吸水链霉菌生长。
3、嗜热吸水链霉菌抗原制剂诱导豚鼠和C57BL/6小鼠大棚肺模型豚鼠（T组）：第1周末，可见淋巴细胞为主的炎症细胞浸润；第2周末，可见肺泡壁增宽，单核细胞渗出；第3周末，可见肉芽肿形成；第12周末，可见成纤维细胞数目增多。C57BL/6小鼠（C组）：小鼠肺组织病理学改变同豚鼠。豚鼠、小鼠肺组织研磨后置于Emerson液体培养基中培养后均可见嗜热吸水链霉菌生长。
结论:
1、嗜热吸水链霉菌作为致病菌可以在实验动物体内引起与人类农民肺相似的过敏性肺泡炎的病变，0.3ml为构建嗜热吸水链霉菌抗原诱导豚鼠大棚肺模型的标准剂量。
2、雾化吸入和鼻内滴注两种方法均可诱导大棚肺动物模型，二者所致影像学和病理学改变基本一致，雾化法所致肺泡炎改变较鼻滴法迟一周出现。
3、嗜热吸水链霉菌抗原制剂雾化吸入和鼻内滴注在豚鼠和C57BL/6小鼠上均可成功诱导大棚肺模型，二者病理学改变一致。