为了获得Asia-1口蹄疫病毒非结构蛋白3B的单克隆抗体,以Asia-1型FMDV JS/05毒株RNA为模板,扩增3B蛋白基因,并克隆至pET-30a载体,进行原核表达及纯化。以Asia-1型口蹄疫病毒、纯化的3B蛋白为抗原,免疫4-6周龄的Balb/c雌鼠,经过4次免疫后,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞按5:1进行融合,用间接ELISA方法对融合后的细胞进行筛选,并进行4次有限稀释,阳性细胞扩大培养后腹腔注射小鼠,制备腹水,并对制取的腹水进行亚型鉴定,反应原性和效价鉴定。将3B蛋白拆分,并构建pGEX-4T1载体,融合GST标签表达,通过间接ELISA验证3B抗体的反应特性,并通过口蹄疫3ABC检测试剂盒筛选临床阳性和阴性血清,利用本实验获得的3B抗体建立竞争ELISA方法,用于检测临床样品中口蹄疫3B蛋白的抗体。结果表明,获得一株稳定分泌抗口蹄疫病毒3B蛋白的细胞株,其抗体亚类为IgM,腹水效价为1:12800,通过Western boltting和间接免疫荧光实验鉴定其能识别口蹄疫病毒3B蛋白。SDS-PAGE结果表明,成功表达和纯化3B截短融合GST标签的重组蛋白,间接ELISA结果表明,本实验获得的抗体和3B1蛋白特异性反应。通过口蹄疫3ABC检测试剂盒,筛选出临床4份阳性血清,和4份阴性血清,利用本实验获得的3B抗体建立竞争ELISA方法,检测口蹄疫3B抗体,结果显示4份阳性血清显示出不同程度的抑制率,且具有剂量依赖性,4份阴性血清无抑制作用,无剂量依赖性,表明此竞争ELISA方法和3ABC检测方法符合率100%。