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本研究对1株鹅源副粘病毒分离株26/goose/guangdong/98(简称26号分离株)进行外源病毒检测、遗传稳定性试验、生物学特性的测定及基因组的测序,并将其制备成油乳剂灭活疫苗对鹅进行免疫保护试验。为研制开发标准化的鹅源副粘病毒病疫苗奠定基础。
外源病毒检测试验表明,该毒株不含禽流感病毒、减蛋综合征病毒、小鹅瘟病毒、传染性支气管炎病毒、鸭瘟病毒、禽白血病抗原、支原体和常见细菌。稳定性试验结果表明,鸡胚传代10代以后,该病毒的HA效价均在≥9log2。致病性试验表明,该毒株可以使30日龄非免疫鸡和20日龄非免疫鹅都发病。毒力测定试验结果显示:鸡胚平均致死时间(MDT)为51h,脑内致病指数(ICPI)为1.70,静脉致病指数(IVPI)为2.54,按照NDV强弱毒株的划分标准,该毒株为强毒株。该毒株对鸡胚的半数感染量(EID50)为10-8.43/0.2mL。
基因组测序及分析结果表明:除去3-leader和5-trailer,基因组序列长度为15120nt,含有6个完整的开放阅读框(ORF),大小依次为1470nt、1188nt、1095nt、1662nt、1716nt和6615nt,分别编码6种蛋白,即NP、P、M、F、HN和L。基因组核苷酸相似性比较的结果表明:该毒株与NDV的强毒株GD/GM/03/Ch(简称GM株)的相似性最高为98.8%,与其他几株鹅源副粘病毒(ZJ1、SF02和NA-1株)的相似性分别为97.7%、97.8%和96.9%,与Clone 30的相似性为83.0%。遗传进化分析表明,该毒株与GM株的亲缘关系最近,与其他几株鹅源副粘病毒的亲缘关系相对较远,与传统疫苗株Clone 30的亲缘关系最远。基于F基因的核苷酸序列的相似性比较结果显示,与NA-1株的相似性最高为98.8%,与SF02株和ZJ1株的相似性分别为97.7%和97.5%,与GM株的相似性为97.1%,与Clone 30株的相似性仅为84.4%;核苷酸遗传进化分析表明:该毒株F基因与NA-1株F基因的亲缘关系最近,与Clone 30株的F基因亲缘关系还是最远。基于HN基因的核苷酸的相似性比较结果显示与GM株的相似性最高为97.7%,与SF02、NA-1和ZJ1的相似性分别为97.5%、97.7%和97.6%,与Clone 30的相似性仅为81.9%。HN基因遗传进化分析表明:该毒株与NA-1株的亲缘关系最近,与Clonr 30株的亲缘关系最远。该毒株F蛋白裂解位点附近的氨基酸序列为RRQKRF,符合强毒株的分子特征,与毒力测定结果一致。本研究还将该毒株的尿囊液用0.1%甲醛溶液灭活24h,灭活效果检验合格后制备成油乳剂灭活疫苗。免疫保护结果表示:试验鹅对该疫苗无不良反应,免疫后抗体可以持续4个月,抗体效价最高可以达到7.2±0.2 log2;与新城疫La Sota株疫苗相比,该毒株油乳剂灭活疫苗产生的HI抗体水平下降趋势较平缓。攻毒保护试验结果表明:不同免疫剂量对鹅的保护率在3/5-6/6之间,其中最小免疫剂量为0.3mL/只。组织病理学切片显示,对照组攻毒鹅病变主要为胰腺坏死,而免疫攻毒组基本正常。试验表明该油乳剂灭活疫苗安全、有效。