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近十年来绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）在分子生物学、细胞生物学以及医药学等方面得到了广泛的应用，它是一类存在于水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。因其荧光性质稳定，生色团形成无需其它辅助因子、甚至可用于活体检测等优点，GFP作为一种新型免疫标记物逐渐取代了许多其它常规荧光标记物。此外，GFP还可以与目的蛋白融合而不改变目的蛋白的性质和定位。但是在实际的应用中，也发现GFP有一些有待克服的缺陷，如荧光有时微弱、难以和背景色区分、与GFP融合表达的蛋白质提纯困难等。针对以上问题，本文拟通过研制抗GFP的单克隆抗体，为解决这些问题提供新型试剂。 针对原核表达GFP作为免疫原制备单抗有一定困难的实际情况，本研究采用基因免疫的方法制备单抗。实验中以表达GFP的真核质粒pVAX1-EGFP为免疫原，建立了有效的免疫程序，并成功研制出GFP的特异性单克隆抗体。真核质粒pVAX1-EGFP免疫程序大致步骤为：大提纯化质粒pVAX1-EGFP，经琼脂糖电泳和真核细胞（P815）转染试验鉴定后，经腿部双侧股四头肌注射免疫6周龄雌性BALB／c小鼠，每只小鼠质粒免疫剂量为100μg，三周后同法进行第二次免疫，六周后第三次免疫，第九周加强免疫，加强免疫后一周采血测血清ELISA抗体效价，同时取免疫小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞Sp2／0-Ag-14进行融合。以间接ELISA试验进行筛选，筛选出阳性克隆，并经有限稀释法三次亚克隆之后，共获得四株稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为1A12，3C8，3D6，4D9。对单抗的特异性鉴定结果表明，杂交瘤培养上清的间接ELISA效价分别为1：3200、1：1600、1：3200、1：2560，腹水效价为1：50000、1：13000、1：40000、1：25000。四株单抗的免疫球蛋白亚类均为IgG1。在Dot-ELISA试验中四株单抗均与原核表达GFP的菌株反应，而对其它菌株不反应。经过Western-blot分析，四株单抗均与27KD扬州大学硕士学位论文条带处的GFP反应，而不与其它条带反应，进一步证明此四株单抗为针对GFP的特异性单抗。 GFP单克隆抗体可扩大GFP检测的灵敏度，拓展GFP的应用范围，预计GFP单抗在抗原定位、融合蛋白纯化、病原体与宿主之间相互作用研究以及新型诊断试剂研制等方面具有重要用途。