大黄汤剂蒽醌类成分测定及其在颅脑损伤中的应用

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目的:采用超高效液相色谱方法对大黄汤剂蒽醌类成分番泻苷B、番泻苷A、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚进行同步定性、定量测定;并检测创伤性颅脑损伤患者鼻饲大黄汤剂后脑脊液中的蒽醌类可吸收成分,为大黄抗颅脑损伤质量控制标准的确定奠定基础;再以该蒽醌类可吸收成分作为干预因素,探讨其对创伤性颅脑损伤模型大鼠脑皮质超氧化物歧化酶活力(superoxi dase dismutase, SOD)的影响,以探索大黄对颅脑外伤的脑保护作用。方法:(1)采用超高效液相色谱方法,色谱柱为UPLC BEH C18色谱柱(2.1×50 mm,1.7μm),以甲醇-0.5%乙酸为流动相,流量为0.5 ml/min,探测波长为254纳米,对大黄汤剂番泻苷B、番泻苷A、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚等7种蒽醌类成分同步进行测定;(2)选择符合诊断标准的创伤性颅脑损伤患者,于鼻饲大黄汤剂4小时后行腰椎穿刺术,收集患者脑脊液,采用上述超高效液相色谱方法检测创伤性颅脑损伤病人脑脊液中蒽醌类成分。(3)将创伤性颅脑损伤病人脑脊液中所检测出的蒽醌类有效成分进行动物实验,用30只Sprague-Dawley大鼠随机分为模型组、假手术组和治疗组(每组10只),治疗组及模型组复制创伤性颅脑损伤SD大鼠模型,假手术组SD大鼠予开骨窗,不打击。治疗组给予大黄素甲醚(40mg/kg)灌胃,假手术组及模型组给予等量生理盐水灌胃,于灌胃24小时后处死,取得脑皮质,采用羟胺法检测大鼠脑皮质SOD活力。结果:(1)大黄汤剂中蒽醌类成分分别为:番泻苷B线性范围为0.255~16.304μg/ml(r=0.9994),平均回收率为97.57%(RSD=3.12%);番泻苷A线性范围为0.177~11.286μg/ml(r=0.9995),平均回收率为98.04%(RSD=2.84%);芦荟大黄素线性范围为0.198-12.666μg/ml(r=0.9986),平均回收率为99.66%(RSD=1.15%);大黄酸线性范围为0.210-26.858μg/ml(r=0.9997),平均回收率为100.12%(RSD=2.17%);大黄素线性范围为0.285-36.428μg/ml(r=0.9984),平均回收率为102.24%(RSD=1.25%);大黄酚线性范围为0.386-24.642μg/ml(r=0.9996),平均回收率为98.86%(RSD=2.68%);大黄素甲醚线性范围为0.268-17.142μg/ml(r=0.9964),平均回收率为97.89%(RSD=2.46%)。其中大黄酸质量浓度(20.223±0.708μg/ml)最大,大黄酚质量浓度(3.101±0.167μg/ml)最低,各成分定量结果均在线性范围之内。(2)创伤性颅脑损伤病人鼻饲大黄汤剂后脑脊液中检测出大黄有效蒽醌类成分为大黄素甲醚。(3)该有效成分进行的动物实验中,SD大鼠脑皮质SOD活力在假手术组(19.918±1.067 U/mg prot)较模型组(18.757±1.821U/mg prot)显著增高(p<0.05),治疗组(22.083±2.578 U/mg prot)较假手术组显著增高(p<0.05)。结论:(1)超高效液相色谱方法同步测定大黄汤剂7种蒽醌类成分,该方法学具有快速、简单、灵敏、精确和有效的特点。(2)发现大黄汤剂有效成分-大黄素甲醚为创伤性颅脑损伤患者脑脊液中可吸收的有效生物成分,该成分可能为大黄抗颅脑损伤的有效成分。(3)大黄素甲醚可显著增加创伤性颅脑损伤模型大鼠脑组织SOD活力,提示大黄素甲醚具有抗氧化颅脑保护作用。
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