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心律失常是心血管疾病众中,最为严重的疾病之一。也是临床上最常见的心血管疾病。近些年来,缓慢型心律失常日益增加的发病率引起了人们的注意,其发病机制也越来越受到了人们的关注。当下,诊治缓慢型心律失常的治疗方案之一为植入人工心脏起搏器。心脏起搏植入术的应用已有50多年的历史了。如今的人工心脏起搏器,无论是结构还是功能,已经达到了一个十分高的水准。但是在如今,植入起搏器仍然存在一些难以克服的缺陷和困难。 近些年来,关于microRNA的研究越来越多,其在心血管疾病方面的研究越来越透彻。在心肌细胞中,miR-1,miR-133,let-7等表达极为丰富,且miR-21与miR-208等microRNAs与房颤及心律失常的发生有着密切的关联。但是microRNA在缓慢型心律失常方面的研究却少之又少,进展相对缓慢。近些年来,缓慢型心律失常的发病率日益增加,且其缺乏有效的早期预警诊断方法及标志物。 目的:本实验以人体内稳定存在的U6为内参,通过对比缓慢型心律失常患者和健康人体内microRNA-1,microRNA-21,microRNA-133,microRNA-208等microRNAs相对于内参U6的相对表达量,观察microRNA和缓慢型心律失常之间是否存在着一定的联系,并深入探讨microRNA与缓慢型心律失常发生发展的关系。 方法:一、收集缓慢型心律失常患者及健康体检者的当天新鲜全血,并将收集的血清分成三组。分组:病态窦房结综合征患者组(sick sinus syndrome,SSS)、房室传导阻滞组(atrioventricular block,AVB)、健康体检者组(health,H)。二、用柱状法,经过裂解红细胞,分相,沉淀及洗涤等步骤将各组新鲜全血的RNA提取出来。三、将提取出来的RNA用紫外分光光度计测量浓度和纯度(A260/A280),保留高纯度的RNA(A260/A280>2)进行下一步逆转录。四、利用逆转录仪将得出的RNA产物,加入microRNA-1,microRNA-21,microRNA-133,microRNA-208及内参microRNA-U6作为引物,逆转录成cDNA。五、用pcr仪器将cDNA通过实时荧光定量PCR(real-time PCR)扩增,测出扩增产物的CT值(每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数),检测出对比内参U6,各种microRNA在各缓慢型心律失常组中,相对于健康人组的相对表达量,并做统计分析。 结果:(1)、SSS组相对于H组,microRNA-21降低至132%(P<0.05),其余microRNA-1,microRNA-133,microRNA-208的表达水平与健康人组的表达相比无显著差异(P>005)。(2)、AVB组相对于H组,microRNA-1降低至18,7%,microRNA-21降至7.3%,microRNA-208降至22.2%(P<0.05),microRNA-133的表达与健康人组的表达相比无显著差异(P>0.05)。 结论:1、在病态窦房结综合征病人中,microRNA-21显著减少。2、在房室传导阻滞病人中,microRNA-1,microRNA-21,microRNA-208显著减少。