【摘 要】
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为了解决疫苗免疫家畜布鲁氏菌病病原鉴定及与弱毒疫苗间鉴别诊断的难题,本研究筛选出了牛种、羊种、猪种、犬种布鲁氏菌和A19、S19疫苗株的特异性基因作为分子标记,分别设计引物开展了鉴别型PCR检测方法研究;再将建立的单重PCR诊断方法进行逐级融合优化,探索了布鲁氏菌鉴别型多重PCR诊断方法。研究结果如下:（1）筛选确定流产布鲁氏菌缺失基因NC7250,猪种布鲁氏菌特异基因GL2189,犬种布鲁氏菌w
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为了解决疫苗免疫家畜布鲁氏菌病病原鉴定及与弱毒疫苗间鉴别诊断的难题,本研究筛选出了牛种、羊种、猪种、犬种布鲁氏菌和A19、S19疫苗株的特异性基因作为分子标记,分别设计引物开展了鉴别型PCR检测方法研究;再将建立的单重PCR诊断方法进行逐级融合优化,探索了布鲁氏菌鉴别型多重PCR诊断方法。研究结果如下:（1）筛选确定流产布鲁氏菌缺失基因NC7250,猪种布鲁氏菌特异基因GL2189,犬种布鲁氏菌wbk D-wbk F基因缺失片段,A19和S19疫苗株基因WP788.1缺失片段、S19 ery C基因缺失片段和布鲁氏菌共有基因BP26为鉴别诊断分子标记基因,设计特异性引物,建立了布鲁氏菌PCR检测方法。分别对各个PCR反应的引物浓度、反应条件等进行了优化;检测方法具有较好的特异性,能够鉴定不同的布鲁氏菌种和A19、S19疫苗株。（2）以布鲁氏菌GL2189、NC7250、wbk F-wbk D、WP788.1、ery C和BP26基因设计引物,建立了布鲁氏菌鉴别型多重PCR检测方法。对引物终浓度和反应温度进行了优化,确定了2:1:1:4:2:4的引物浓度比例,最佳退火为60℃;对检测方法进行了特异性、灵敏度、重复性验证。与链球菌、沙门氏菌等菌株均呈阴性反应,最低能检测1.99×10-1ng/μL的S2的DNA模板。成功建立了6种布鲁氏菌单重PCR检测方法和1种布鲁氏菌鉴别型六重PCR检测方法。
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