TIMMDC1表达下调抑制人胃腺癌细胞生长和转移的作用及机制

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wanghuaifei
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目的:  本文旨在观察TIMMDC1/C3orf1对人胃腺癌细胞的增殖、侵袭和转移中的作用,并探讨其潜在的分子机制.  方法:  1. 通过构建质粒、转染、筛选挑单克隆、扩大培养细胞后,利用Western blot技术及Real-time PCR技术鉴定SGC-7901细胞和BGC-823细胞的TIMMDC1是否表达下调成功.  2. 通过CCK8试剂盒分别检测SGC-7901细胞和BGC-823细胞对照组、空载组、低表达组吸光度值并绘制生长曲线以分别比较三组细胞增殖能力的差异.  3. 通过划痕实验检测TIMMDC1表达下调后对SGC-7901细胞和BGC-823细胞迁移能力的影响.  4. 通过Transwell小室实验检测TIMMDC1表达下调后对SGC-7901细胞和BGC-823细胞的迁移及侵袭能力的影响.  5. 通过体内裸鼠成瘤及转移实验技术检测 TIMMDC1 表达下调后对SGC-7901细胞体内增殖及转移能力的影响.  6. 用蛋白免疫印迹技术检测SGC-7901细胞和BGC-823细胞TIMMDC1表达下调后相关信号通路蛋白的变化.  7. 通过分光光度法检测 TIMMDC1 表达下调后对 SGC-7901 细胞和BGC-823细胞线粒体复合体I-IV活性的影响.  8. 通过ATP检测试剂盒方法检测TIMMDC1表达下调后对SGC-7901细胞和BGC-823细胞ATP生成的影响.  9. 利用海马生物能量代谢检测仪检测TIMMDC1表达下调后对SGC-7901细胞和BGC-823细胞线粒体能量代谢和糖酵解的影响.  10. 本试验研究应用到的统计分析均由SPSS 20.0统计软件进行统计分析,P<0.05有统计学意义.  结果:  1. Western blot和Real-time PCR结果显示低表达组TIMMDC1蛋白表达量和mRNA水平显著下调,证明TIMMDC1低表达模型制备成功.  2. SGC-7901细胞和BGC-823细胞TIMMDC1表达下调后,细胞的增殖、迁移及侵袭能力受到显著抑制,SGC-7901细胞在体内的成瘤和转移能力也下降.  3. SGC-7901细胞和BGC-823细胞TIMMDC1表达下调后,线粒体的氧化磷酸化水平(OCR)和糖酵解能力(ECAR)下降.  4. SGC-7901细胞和BGC-823细胞TIMMDC1表达下调后,Akt和GSK-3β的磷酸化水平降低,β-catenin蛋白表达量下降但是总的Akt和GSK-3β的蛋白表达量并未下降.  结论:  1. TIMMDC1表达下调后会抑制人胃腺癌SGC-7901细胞和BGC-823细胞的增殖、迁移和侵袭能力.  2. TIMMDC1表达下调后会降低SGC-7901细胞和BGC-823细胞的线粒体能量代谢和糖酵解.  3. TIMMDC1基因参与调节人胃腺癌SGC-7901细胞和BGC-823细胞的Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路.
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