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海带经酶解,除去褐藻酸,得到海带硫酸多糖粗品。粗品经DEAE-23,DEAE-41离子交换纤维素分离纯化,可以得到三种纯化的硫酸多糖LAS-1、LAS-2、LAS-3,经纯度检验无杂质。以LAS-3为代表,理化性质检测表明其糖含量为36.90%,硫酸基含量为11.91%,分子量在2690KD左右。由于多糖分子量的分布与其生物活性的高低有直接联系,当分子量较大时,结构复杂,理化性质研究及其生物学功能均受到一定的限制。因此寻找合适的降解多糖的新技术,变得越来越重要。降解多糖有很多方法,经典的酸解法、酶解法对海带硫酸多糖都有一定的弊端。近来研究表明,酶法、氧化降解法、超声波法及γ—射线法的降解过程中,自由基都发挥着重要的作用。因此我们设计实验验证自由基降解的可行性。 在自由基的降解过程中,我们采用两种体系:Harber-Weiss反应体系和Fenton反应体系。在H体系中,不是H2O2的氧化作用降解多糖,因为仅加入H2O2降解程度很低。当在降解体系中,加入有机酸和Vc后,多糖的降解发生了很大的变化,颜色变浅,粘度降低,多糖的分子量也降低,在琼脂糖凝胶电泳图谱上表现为较集中的谱带。我们述研究了H体系多糖的降解程度受环境温度和底物浓度的影响。改变反应温度,在15-40℃的范围内,降解程度与温度呈正比;改变反应浓度,Vc和H2O2浓度从1-20mmol/L变化范围内,降解程度和浓度成正比;但如果浓度再增大,降解程度变化不大。F体系按照H体系得到的最适浓度进行降解,效果显著。 海带硫酸多糖降解之后,通过脱盐,浓缩,冻干得纯品。用超滤和高效液相色谱测定其分子量,同时检测理化性质。利用H体系和F体系降解的海带硫酸多糖,分子量分别为10,000Da和8,000Da。硫酸酚法测定多糖含量,降解后多糖糖含量略有上升,可能是由于进一步纯化的原因;比浊法测定硫酸基含量,降解后多糖硫酸基含量略有下降,降解过程硫酸根损失不大。气相色谱法和纸层析法测定单糖组成,降解前后没有发生变化,均含有岩藻糖、甘露糖、半乳糖、木糖和糖醛酸。利用红外光谱检测,海