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体色是鱼类一种较独特的表型性状,有重要的生物多样性价值和遗传学理论研究价值。鱼类体色变异研究一直是系统发育、脊椎动物遗传学和进化生物学的重要研究内容。瓯江彩鲤(Cyprinus carpio var. color)是分布在我国瓯江流域的一种鲤科鱼类,有“全红”、“大花”、“麻花”、“粉玉”和“粉花”五种基本体色类型,是进行鱼类体色研究的良好材料和模型。本论文以瓯江彩鲤为研究材料,在实验室前期研究工作的基础上,对黑色素合成通路中的四个基因(Sox10、Agouti、Tyrp1、Dct)进行了克隆及其在不同体色类型中表达分析,具体内容如下:1、Sox10基因的克隆和表达分析瓯江彩鲤Sox10基因的cDNA全长为2830bp,包括9bp5’-UTR、1375bp3’-UTR、和1446bp开放阅读框(编码481个氨基酸)。氨基酸序列的系统发育分析表明,瓯江彩鲤Sox10基因的氨基酸序列与其他部分物种的相似性在59%~94%之间。RT-PCR分析表明,该基因在瓯江彩鲤皮肤、肌肉、眼睛和鳔组织中的表达量最高,鳃和心的表达量次之,肾和肝中没有表达。荧光定量PCR分析显示,Sox10基因在体色为白色类型(“粉玉”体色)皮肤中的表达量显著地高于其他体色(P<0.05),“粉花”黑色皮肤中的表达量最低,显著低其它体色类型(P<0.05),而其他体色类型的表达差异不显著(P>0.05)。结果初步发现,Sox10基因在瓯江彩鲤的体色变异中发挥着调控作用。2、Agouti基因的克隆和表达分析瓯江彩鲤Agouti基因的cDNA全长为1278bp,包括94bp5’-UTR、806bp3’-UTR、和375bp(编码125个氨基酸)的开放阅读框。与其他物种Agouti基因的氨基酸比对发现,瓯江彩鲤Agouti基因的蛋白序列与其他脊椎动物的相似性为34%到90%。半定量RT-PCR检测发现:Agouti基因在瓯江彩鲤的皮肤、肌肉、眼睛、鳃、肾、鳔、心和肝中都有表达,皮肤和肾中的表达量最多。荧光定量PCR分析显示,Agouti基因在大花红表皮中的表达量显著高于在其他表型中的表达量(P <0.01),而粉花黑表皮中的表达量最低(P <0.01),其他体色类型如大花黑表皮、全红红表皮、粉玉白表皮表达差异不显著(P>0.05)。本部分结果表明:Agouti基因是瓯江彩鲤体色变异的重要调控因子。3、Tyrp1和Dct基因的克隆和表达分析瓯江彩鲤Tyrp1基因的cDNA全长为1680bp,由1581bp的编码区(编码526个氨基酸),87bp的5’-UTR区和12bp的3’-UTR区组成;Dct基因cDNA全长为1712bp,由202bp的5’-UTR,1458bp的编码区(编码485个氨基酸)和52bp的3’-UTR区组成。半定量RT-PCR检测结果表明:Tyrp1基因在瓯江彩鲤的皮肤、肌肉和眼睛中表达量最高,鳃、鳔和心中表达量次之,肾和肝中没有表达;Dct基因除了在肝中没被发现,其余组织中都有表达,且在眼睛中表达量最高。qRT-PCR结果显示:Tyrp1基因在黑色表皮(大花黑表皮和粉花黑表皮)中的表达量显著高于在其他类型皮肤中(P<0.01)。Dct基因在全红红色表皮部分的表达量最高,但和其他类型的表皮差异不明显(P>0.05)。在同一种类型表皮里,Tyrp1的表达量一直高于Dct基因。