论文部分内容阅读
椴树又名菩提树,是古老而又传统的民间药用植物,其花和皮具有清热解表之功效,在欧洲及美洲作为镇静、催眠、抗焦虑等药物被广泛使用。紫椴(Tilia amurensis Rupr.)作为椴树科(Tiliaceae)椴树属亚洲的特有种,其药学研究鲜为报道。在前期对紫椴花抗炎镇痛抗菌药效学研究的基础上进一步对其改善睡眠药效学及其药效物质基础进行了研究。为了确定其改善睡眠的作用及阐明作用的活性成分,采用活性成分导向分离法对紫椴花改善睡眠作用有效成分进行了系统研究。首先采用戊巴比妥钠协同实验方法对紫椴花改善睡眠作用有效部位进行了研究,实验结果显示紫椴花乙酸乙酯组分具有显著的延长戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间的作用,因此确定紫椴花乙酸乙酯组分为紫椴花改善睡眠作用的有效部位。通过对有效部位量效关系及时效关系的考察,确定紫椴花有效部位给药剂量在0.54g/kg,连续给药7天,可达到改善睡眠作用的最佳效果。然后对紫椴花有效部位的化学成分进行了系统研究。(1)通过HPLC-MS/MS联用技术及MSE对紫椴花乙酸乙酯组分主要化学成分进行了表征,在正、负离子模式下共检测出39个离子峰,鉴定出24个化合物,其中有80%为以山奈酚、槲皮素、异鼠李素、金合欢素为母核的黄酮类化合物,同时检测出大量的原花青素及其聚合体。(2)采用反复硅胶柱色谱、ODS柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱以及HPLC等现代分离技术手段,对紫椴花改善睡眠作用的有效部位化学成分进行了系统分离,结果共分离出17个化合物,通过理化性质及1H-NMR、13C-NMR、HMBC、HSQC等1D、2D-NMR波谱学测试手段,并结合Q-TOF-MS质谱分析,鉴定出14个化合物的结构,其中7个黄酮类化合物,7个其他类化合物。14个化合物均为首次在紫椴中分离,6个化合物为首次在椴树属中分离。(3)建立了 HPLC法同时测定紫椴花乙酸乙酯组分中Astragalin、Tiliroside、Isoquercitrin三种化学成分的含量的方法,采用ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸为流动相进行梯度洗脱,流速1mL/min;全波长检测。结果被测成分在各自浓度范围内线性关系良好,平均回收率为95%~100.97%,RSD 为 2.7%~4.6%。最后采用戊巴比妥钠协同实验方法对已知含量较大的三种化合物(Astragalin、Tiliroside、Isoquercitrin)的改善睡眠作用进行了实验研究,以空白组和有效部位组做对照,在三种单体给药剂量相同的情况下Tiliroside和Isoquercitrin具有明显的延长戊巴比妥钠所致小时睡眠时间及缩短入睡潜伏期的作用,其效果与空白组和有效部位组对比具有显著差异。此实验结果表明Tiliroside和Isoquercitrin为紫椴花改善睡眠作用的有效成分。通过对紫椴花改善睡眠有效部位的药理研究和系统深入的化学成分研究,进一步阐明了紫椴花改善睡眠作用的物质基础,这将为紫椴药用价值的开发提供科学依据,为紫椴资源的综合开发利用提供新方向。