论文部分内容阅读
目的:畸形精子症(Teratozoospermia)是指精子正常形态所占百分比低于4%(2010年,WHO规定值为4%)的男性不育症。现已报道的畸形精子症包括精子鞭毛多发形态学异常(Multiple morphological abnormalities of the sperm flagella,MMAF)、大头多尾精子症(Large headed multiflagellar spermatozoa)、圆头精子症(Globozoospermia)以及无头精子症(Acephalic spermatozoa syndrome,ASS)。第一部分,系统全面的阐述畸形精子症的分类及临床表现、发病机制及遗传病因、诊断及鉴别诊断、基因检测、遗传咨询以及辅助生殖结局,从而为畸形精子症研究奠定良好的理论基础。第二部分,对在男科门诊就诊的1532例患者的精子形态进行研究分析,从而为男性不育临床诊断提供重要的参考依据。第三部分,针对25例MMAF患者,从遗传学角度明确其致病原因,从而为患者的临床治疗及遗传咨询奠定基础。第四部分,研究分析20例圆头精子症患者,进一步揭示圆头精子症的发病机制为此类患者临床诊断及治疗奠定基础。方法:第一部分,从NCBI数据库搜集、查阅畸形精子症文献,综述畸形精子症的遗传学病因、诊断治疗及辅助生殖结局等。第二部分,对于男科门诊就诊的1532例患者进行至少三次的精液常规检查以及精子形态分析。第三部分,针对25例MMAF患者,采集患者外周血并储存于-80℃冰箱。然后通过以下几种检测技术对MMAF患者进行基因诊断研究:(1)利用多重PCR靶向测序技术对MMAF四种致病基因(DNAH1/CFAP43/CFAP44/CFAP69)全外显子区位点进行变异检测(2)利用全外显子组测序技术(Whole-Exome sequencing,WES)对MMAF患者全外显子区域进行变异检测(3)Sanger测序验证变异位点。第四部分,针对20例圆头精子症患者,采集患者外周血血并储存于-80℃冰箱。然后通过以下几种检测技术对圆头精子症患者进行基因诊断研究:(1)利用PCR扩增技术对DPY19L2全外显子区变异位点进行检测(2)利用WES对圆头精子症患者的全外显子区域进行变异检测(3)Sanger测序验证变异位点。结果:首先,对于男科门诊就诊的1532例患者进行精子形态学研究,最终600例患者被诊断为男性不育,600例不育患者中的60例被确诊为畸形精子症。不幸的是60例中的15例断头精子症患者未能取得外周血,所以本研究最终只对45例取得外周血的畸形精子症患者(25例MMAF患者和20例圆头精子症患者)进行基因诊断研究。其次,在25例MMAF的4例中检测出DNAH1基因1个新的纯合移码突变(c.11023delT)以及3个新的复合杂合突变。最后,在20例圆头精子症患者的5例中检测出DPY19L2基因变异即4个外显子纯合缺失以及1个新的纯合错义突变(c.1889G>A)。结论:本研究发现,精子形态学是诊断男性不育的一个必不可少的重要指标,为临床诊断提供了重要的参考依据。另一方面,明确了4例MMAF患者以及5例圆头精子症患者的遗传学病因。DNAH1和DPY19L2基因变异,不仅丰富了其基因的突变谱,有利于基因型-表型的对应,而且为患者后续的临床评估、辅助生殖以及遗传咨询等提供了重要依据。