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试验I、鸡胚小肠上皮细胞培养与鉴定目的：培养鸡胚小肠上皮细胞。方法：从18日龄鸡胚中取一段十二指肠段,用组织块培养法和以50μg·mL-1嗜热菌蛋白酶与0.2μg·mL-1胶原酶I型联合消化获取的肠隐窝,在37.5℃、5% CO2的条件下,用含5%胎牛血清的完全培养基培养小肠上皮细胞。用差速消化法和差速贴壁法,进一步纯化、传代。采用形态学观察、Giemsa染色和免疫化学染色法进行小肠上皮细胞鉴定。结果：组织块培养法和酶联合消化培养法都可以得到鸡胚小肠上皮细胞,纯化后纯度理想。结论：鸡胚小肠上皮细胞培养成功,培养的细胞纯度理想,为下一步研究提供了实验材料。试验Ⅱ、依普拉芬对鸡胚小肠上皮细胞生长的影响目的：在建立鸡胚小肠上皮细胞体外培养方法的基础上,研究依普拉芬对鸡胚小肠上皮细胞增殖、分化和代谢功能的影响。方法：取生长状态良好的第二代小肠上皮细胞接种于96孔板,添加含1%FBS的DMEM对照组和含不同浓度的依普拉芬实验组,72 h后分别用MTT法、PNPP法测定小肠上皮细胞增殖率和小肠上皮细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性。结果：(1)与对照组相比,10-6 mol·L-1,10-7 mol·L-1和10-8 mol·L-的依普拉芬均显著促进小肠上皮细胞增殖(P<0.01); 10-5mol·L-1依普拉芬显著抑制小肠上皮细胞的增殖(P<0.01)；(2)与对照组相比,10-6 mol·L-1、10-7 mol·L-1和10-8 mol·L-1依普拉芬极显著促进小肠上皮细胞ALP活性(P<0.01),10-9mol·L-1显著促进小肠上皮细胞ALP活性(P<0.05); 10-5mol·L-1(?)勺依普拉芬显著抑制小肠上皮细胞内ALP活性(P<0.01)。结论：依普拉芬能显著促进小肠上皮细胞的增殖；使小肠上皮细胞内的ALP显著增加；但依普拉芬浓度越大,其上皮细胞则呈现明显的抑制作用。试验Ⅲ、依普拉芬对鸡胚小肠上皮细胞钙离子通道基因表达的影响目的：在建立鸡胚小肠上皮细胞体外培养方法的基础上,研究TRPV6在小肠上皮细胞上表达的定位以及依普拉芬对TRPV6、CaBP-D28k和PMCA1b mRNA表达的影响。方法：免疫细胞化学方法研究TRPV6表达定位；用含10-6mol·L-1、10-7mol·L-1、10-8mol·L-1、10-9mol·L-1和10-10mol·L-1不同浓度的依普拉芬以及含1% FBS的DMEM对照组处理第二代鸡胚小肠上皮细胞72 h后,用RT-PCR方法检测其TRPV6、CaBP-D28k和PMCA1b mRNA表达量变化。结果：(1) TRPV6表达定位于鸡胚小肠上皮细胞胞膜上；(2)与对照组相比,10-6 mol·L-1,10-7 mo·L-1、10-8 mol·L-1依普拉芬显著上调PMCA1b和CaBP-D28k mRNA的表达(P<0.01),10-9 mol·L-1依普拉芬作用下TRPV6的表达出现明显上升(P<0.05),10-6 mol·L-1、10-7mol·L-1、10-8 mol·L-1依普拉芬能够显著上调TRPV6 mRNA表达(P<0.01)。结论：鸡胚小肠上皮细胞胞膜上存在TRPV6表达；依普拉芬能显著上调小肠上皮细胞TRPV6、CaBP-D28k和PMCA1b mRNA表达量。