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抗坏血酸过氧化物酶(APX)是植物体内活性氧清除酶系的重要成员,在植物抗逆反应中发挥着重要的作用。本研究从紫花苜蓿体细胞胚状体中克隆了一个新的抗坏血酸过氧化物酶基因MsAPX2,并将此基因转入烟草。转基因烟草的抗逆鉴定结果表明,该基因的过量表达提高了烟草的综合抗逆水平。具体研究结果如下：1.成功克隆了MsAPX2基因,该基因包含一个753bp的开放阅读框(ORF),编码250个氨基酸。推测的MsAPX2蛋白序列中含有典型的血红素结合位点、底物结合位点和K+结合位点,因而MsAPX2为典型的抗坏血酸过氧化物酶编码基因。2.成功构建植物表达载体pCBC-MsAPX2,并用于烟草转基因。对T1代转基因烟草植株的PCR.RT-PCR以及bar基因金标免疫试纸条检测表明：MsAPX2已经成功插入烟草基因组中并能稳定遗传给后代；bar基因也能够稳定遗传给后代并正确表达蛋白质。3.对T1代转基因烟草植株的耐盐性进行鉴定,结果表明,转基因植株能在150mM的NaCl浓度下正常生长,而对照组在100mM NaCl浓度下生长已受到抑制；叶盘在2MNaCl中浸泡3天,转基因植株叶片失水、失绿不明显,而对照组明显失水、失绿；100mMNaCl浇灌后,转基因植株体内AsA含量、APX活性、脯氨酸含量明显高于对照组,而丙二醛含量明显低于对照组。这显示MsAPX2的表达提高了转基因烟草的耐盐性。4.对T1代转基因烟草植株进行了抗旱鉴定,结果表明,15%PEG浸泡3天后,非转基因植株叶盘边缘明显萎蔫,而转基因植株的叶盘没有明显变化。干旱处理6天后,非转基因植株出现明显的萎蔫,而转基因植株则正常生长。转基因植株中的AsA含量、脯氨酸含量、丙二醛含量和APX活性等指标说明,MsAPX2的表达提高了转基因烟草的抗旱性。5.对T1代转基因烟草植株进行抗寒性鉴定,结果表明,在4℃处理6天后,转基因植株的AsA含量、脯氨酸含量、丙二醛含量、APX活性等指标显示,MsAPX2的表达提高了烟草的抗寒性。6.对T1代转基因烟草植株进行抗氧化性鉴定,结果表明,在30%H202处理3天后,非转基因植株的叶盘的枯黄现象明显,而转基因植株叶盘受损伤小；3%H202处理36h,转基因植株的AsA含量、脯氨酸含量、丙二醛含量、APX活性等指标显示,MsAPX2的表达提高了烟草的抗氧化能力。