论文部分内容阅读
胃泌素以其重要而广泛的生理作用成为研究得最多的胃肠激素，并被最早应用于中医领域的研究。胃泌素除具有传统的促进胃酸分泌作用外，还是胃肠道和其他组织的生长因子，现在更倾向于认为刺激生长是胃肠道胃泌素的最重要功能。已有的资料表明，胃泌素与脾虚证关系密切，脾虚病理过程中胃泌素水平处于紊乱状态。我们在国内首次建立了大鼠胃壁细胞分离方法，建立了壁细胞胃泌素受体放射配基结合法，尝试从壁细胞表面胃泌素受体、胞内第二信使水平入手探讨脾虚证的本质以及益气健脾中药的细胞水平的作用机制。1.大鼠胃壁细胞分离方法的建立 利用Pronase-EDTA消化翻转的大鼠胃袋以游离胃粘膜细胞，利用Percoll线性密度梯度作为介质以富集壁细胞，所得壁细胞纯度在65％以上，台盼蓝排除法测得细胞活率大于92％。首次在国内分离到纯度较高的大鼠胃壁细胞，为壁细胞相关研究提供了较理想的实验工具。2.大鼠壁细胞胃泌素受体放射配基结合法的建立与方法学考察 以125I-[Leu15]-gastrin17-I为标记配基，以大鼠胃壁细胞悬液为受体制备，在国内首次建立了大鼠胃壁细胞胃泌素受体放射配基结合实验 歪克：脾出大鼠同区蛔胞同泌月受体及中殇黄苗的词控作用研究方法．反应体系总体积为 200ul，37T恒温水陇荡孵育 30min．yX 49型玻璃纤维滤膜分离结合和游离配基．经 L i gand浮序进行非线性拟合，Scatchard作困求出胃泌素受体结合饨Bmax回4．4604 x 10－“M，Ld吕1．249x 10－‘M．单点法求出特异结合位点数 703．＂ites／cell．细胞浓度在0．25刁 x 10七 ＊／L范围内，与标记配基特异性结合容量成正比．同一样品特异结合量测定方法变异系数为7．04儿符合受体结合实验方法学要求。竞争抑制实验证明“订Gastrin与大鼠胃壁细胞受体制备结合特异性良好。3．m大瓦＠细胞胃况受体及黄茂的调节作用船 利用我们建丘的壁细胞胃泌素受体放射配基结合法，研究发现大黄脾虚模型大鼠壁细胞胃泌十受体结合容量明显低于正常（P硼．01）；经中药黄芭治疗后，胃泌素受体结合位点数显天回升，与模型组比较有非常显著差异（P北．01）。椎测胃泌素受体可能参与了脾虚证的病理过程，调节胃泌素受体结合容量可能是中药黄氏发挥健脾益气作用的细胞水平的新机制。4．m大鼠羹k砧浆游离匆离子水早o茂的调节作用研大 采用Fura刁／AM ＆光分光先度法检测壁细胞静息状态下和胃泌素刺激下胞内第H信使钙离子水平（［Ca“］i），尝试从胞内信使水平阐释脾虚证的本质以及健脾益气方药的作用机理．研究发现，大黄脾虚模型大鼠壁细胞静息状态下［CS‘”］i 明显低于正常大鼠（P＜0．01），胃泌素刺激后K‘”＊升高幅度亦明显低于正常组＊d．01)和模型组Od．01八 黄蔑治疗组大鼠静息状态下壁细胞［Ca‘“］i 比模型组略有升高，但无统计学意义O刊．05厂 这可能与我们造模程度较重有关．胃泌素刺激下黄蔑治疗组壁细胞K‘“D明显升高，其数值及升高幅度明显高于模型组O＜0．05， 一2 一 广州中医药大学2000届博士学位论文 P刊．01人 其升高幅度与正常组比较无明显差异＊＞O．05L腑大鼠胃壁 细胞静息状态下和胃泌素刺漱下Ka‘”D aP显低于正常大鼠，说明在脾虚 证的病理过程中壁细胞功能处于一种低代谢状态，推测胞内钙库容量可 能降低，而且壁细胞表面胃泌素受体结合位点数下调或／和功能下降，不 能正常介导胞外信号。健脾益气中药黄茁能够使低下的胞内代谢水平有 一定程度恢复，胞内钙库客量有一定增大，并能使胃泌素受体数上调和／ 或功能加强，这可能是黄蔑健脾益气作用的一个细胞水平的新机制。 综合文献资料和我们的研究结果，我们推测壁细胞胃泌素受体可能 参与了脾虚证的病理过程，脾虚证很可能是一种胃泌素受体相关性疾病； 调节壁细胞胃泌素受体及胞内第二信使水平，可能是黄蔑发挥益气健脾 作用的细胞水平的新机制。我们设想，通过进一步的临床和实验研究， 有可能通过受体调节开辟一个治疗脾胃病证的新的途径和方法，同时也 会为从中药中开发受体激动剂和桔抗剂提供新的思路．这对于中医药理 论的发展和指导临床实践，以及中药的现代化都将会产生深远影响．