【摘 要】
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双酚A(Bisphenol A, BPA),是近几年从食品塑料包装材料中新发现的一种“内分泌干扰物(Endocrine Disrupting Chemicals, ECD)”,具有某些雌激素特性。无论在食品包装材料,还
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双酚A(Bisphenol A, BPA),是近几年从食品塑料包装材料中新发现的一种“内分泌干扰物(Endocrine Disrupting Chemicals, ECD)”,具有某些雌激素特性。无论在食品包装材料,还是在环境中,其含量都很低,用常规HPLC方法无法快速分析。本论文旨在研究快速检测双酚A的酶联免疫法(ELISA),这对食品安全监督以及技术储备有着重要的意义。本文首先采用重氮化法在BPA分子上引入羧基,接着将其与牛血清白蛋白(Bovine serum albumin, BSA)和卵清白蛋白(Ovalbumin, OVA)偶联,制备免疫抗原BPAH-BSA和包被抗原BPAH-OVA。其紫外扫描光谱和红外光谱表明偶联成功。通过紫外分光光度法估算BPAH-BSA和BPAH-OVA的偶联比分别为12.2和13.2。用免疫抗原BPAH-BSA免疫新西兰白兔制备抗血清,产生的抗血清效价最高达到51200。然后以此抗体为基础设计了间接竞争ELISA法,检测限达到0.001μg·mL-1, 50 %抑制率(50 % inhibitory concentration, IC50)为10μg·mL-1。用双酚酸、双酚B、双酚E、4-枯基苯酚试验了此方法的特异性,交叉反应率分别为20.0 %、10.0 %、3.3 %和2.0 %。重现性实验的变异系数范围为4.07～9.95 %,CV %值均小于10%,重复性良好。对聚碳酸酯(PC)材料的桶装纯净水作了1μg·mL-1、3μg·mL-1、10μg·mL-1、25μg·mL-1和50μg·mL-1水平的添加回收实验,五个水平的回收率范围为92.5～107.7 %。综合各因素,本论文研究的ELISA法各项参数都达到了检测的需要,具有实际应用价值。
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